Olink 超微量高靈敏靶向蛋白組分析儀

一,、儀器主要用途：

（1）Signature Q100可以直接對(duì)不同基質(zhì)（包括血漿,、血清、腦脊液,、淚液,、肺泡灌洗液、尿液,、外泌體裂解液和細(xì)胞提取物等）中多種低豐度蛋白分子進(jìn)行超高靈敏度檢測(cè),。僅需要1ul上樣量即可同時(shí)檢測(cè)92種蛋白因子，一個(gè)樣品中可檢測(cè)多達(dá)上千種蛋白,，靈敏度可以達(dá)到fg/ml的水平,，動(dòng)態(tài)范圍可以達(dá)到10個(gè)log值,。這些功能蛋白涉及炎癥、免疫應(yīng)答,、心血管,、腫瘤、神經(jīng),、代謝,、器官損傷、發(fā)育和細(xì)胞調(diào)節(jié)等相關(guān)功能蛋白,。

（2）Olink技術(shù)認(rèn)可度高,，人類血漿蛋白組推薦，美國(guó)癌癥登月計(jì)劃臨床檢測(cè)技術(shù)推薦,，UKB和deCODE大量用于人群隊(duì)列研究,，近幾年發(fā)表文獻(xiàn)超過(guò)1000篇，其中包括高分雜志LANCET,、NEJM,、Cell、Nature,、Science等,，涉及心血管、神經(jīng),、腫瘤,、感染性疾病、免疫炎癥,、內(nèi)分泌,、生殖、眼科,、精神類等各種疾病研究領(lǐng)域的應(yīng)用,。該儀器型號(hào)Signature Q100，產(chǎn)地瑞典,，品牌Olink Proteomics,，代理商是斑馬魚（北京）科技有限公司。

二,、檢測(cè)原理：

（1）Signature Q100超微量高靈敏靶向蛋白組分析儀采用PEA（Proximity Extension Assay,，鄰位延伸技術(shù)）的技術(shù)，這是一種靶向蛋白檢測(cè)方法,，它結(jié)合了基于雙抗體夾心的免疫分析和“DNA 條形碼”技術(shù),，它的原理非常巧妙（如下圖所示）：

（2）首先針對(duì)目標(biāo)蛋白設(shè)計(jì)一對(duì)抗體，讓每種抗體上連接互補(bǔ)的DNA寡核苷酸探針,；這對(duì)抗體特異性地與目標(biāo)蛋白結(jié)合后,，抗體對(duì)上的DNA寡核苷酸鏈雜交,，創(chuàng)建一個(gè)雙鏈DNA"條形碼"，該條形碼對(duì)于靶蛋白來(lái)說(shuō)是的,，并且在數(shù)量上與靶蛋白的初始濃度成正比,。雜交和延伸后立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增信號(hào)放大，最后再通過(guò)SignatureQ100微流控技術(shù)進(jìn)行檢測(cè),。通過(guò)這一過(guò)程,，蛋白濃度信號(hào)會(huì)轉(zhuǎn)換成核酸信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)不同豐度蛋白的檢測(cè),。

三,、實(shí)驗(yàn)流程(以血漿檢測(cè)為例）：

1、免疫孵育：將1ul血漿加入反應(yīng)溶液中,，再加入92對(duì)偶聯(lián)寡核苷酸鏈的抗體,，在4 ℃進(jìn)行免疫孵育反應(yīng)；

2,、延伸及預(yù)擴(kuò)增：結(jié)合在同一蛋白上鄰近的一對(duì)抗體的寡核苷酸單鏈會(huì)形成互補(bǔ)配對(duì),，并在DNA聚合酶等的作用下延伸成一條完整“DNA”條形碼，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增,；

3,、信號(hào)檢測(cè)：將擴(kuò)增后的樣品加入到Signature Q100設(shè)備的微流控芯片中，機(jī)器自動(dòng)進(jìn)行Loading,、定量檢測(cè)以及信號(hào)讀取,。

四、Signature Q100性能優(yōu)勢(shì)：

1,、超高靈敏度：目標(biāo)蛋白檢測(cè)靈敏度（低至fg/ml水平）,，可以在組學(xué)水平上檢測(cè)疾病相關(guān)的成百上千種低豐度蛋白（尤其是血漿、血清,、房水,、腦脊液、胸水,、尿液等各種體液樣本中的低豐度蛋白）,；

2、樣本微量：僅需要1ul上樣量可同時(shí)檢測(cè)多達(dá)92種非常低濃度的蛋白因子,，可檢測(cè)微量樣品,，節(jié)約珍貴樣本,；

3,、多重能力：一個(gè)樣品中可檢測(cè)多達(dá)上千種功能蛋白，達(dá)到組學(xué)研究水平,；

4,、寬動(dòng)態(tài)范圍：檢測(cè)范圍橫跨10個(gè)log值,，可以同時(shí)兼顧不同豐度的蛋白；

5,、高重復(fù)性：引入成熟“DNA”條形碼技術(shù)及定量作為檢測(cè)手段,，重復(fù)性非常好，數(shù)據(jù)質(zhì)量高重現(xiàn)性好,，適合疾病研究,、多組學(xué)聯(lián)合應(yīng)用以及大隊(duì)列大數(shù)據(jù)分析要求。質(zhì)控設(shè)計(jì)和充分驗(yàn)證,，所有數(shù)據(jù)具備組學(xué)水平最高

6,、高特異性：基于PEA技術(shù)的特性，解決了多重免疫檢測(cè)中*存在的抗體交叉反應(yīng)及信號(hào)串?dāng)_問(wèn)題（如下圖A所示）,，而PEA是對(duì)目標(biāo)蛋白的雙抗體識(shí)別和高保真DNA雜交檢測(cè)的雙重要求,，所以不會(huì)檢測(cè)出任何非特異性抗體結(jié)合的信號(hào)（如下圖B所示）：

五、Olink 與質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)比較：

1,、Olink檢測(cè)的靈敏度更高,，能檢測(cè)到fg級(jí)別的蛋白：

質(zhì)譜目前檢測(cè)的多為血漿血清里的偏高豐度的蛋白，實(shí)際上那些中低豐度的蛋白也有非常重要的作用,，這部分蛋白o(hù)link可以非常好的檢測(cè)到,，如下圖所示：

Stefanie M. Hauck團(tuán)隊(duì)的在“Systems biology in cardiovascular disease: a multiomics approach”文中寫道：高豐度蛋白質(zhì)的存在，如血清白蛋白或免疫球蛋白,，在高度復(fù)雜的血漿基質(zhì)中直接影響質(zhì)譜檢測(cè)的靈敏度,，使得低豐度蛋白質(zhì)如細(xì)胞因子沒(méi)辦法好的被檢測(cè)出來(lái)。而鄰位延伸技術(shù)(Olink)相對(duì)于質(zhì)譜分析增加了蛋白質(zhì)組覆蓋的深度,。

2,、Olink PEA在“靶向檢出蛋白數(shù)”、“重現(xiàn)性”方面綜合顯著優(yōu)于DDA,、DIA：

質(zhì)譜在多樣本檢測(cè)時(shí)形成的蛋白與樣本的表達(dá)矩陣中存在比較多的缺失值,。引用參考文獻(xiàn)中數(shù)據(jù)：基于KORA隊(duì)列中的173份血漿樣本進(jìn)行MS（DIA、DDA）與Olink PEA檢測(cè)（8個(gè)Panel）數(shù)據(jù)比較,，結(jié)果如下：

六,、Olink技術(shù) vs 其它蛋白檢測(cè)技術(shù)：

科學(xué)家在瑞典斯德哥爾摩烏普薩拉地區(qū)的不同實(shí)驗(yàn)室對(duì)多個(gè)技術(shù)平臺(tái)進(jìn)行了頭對(duì)頭比較，Olink平臺(tái)的檢測(cè)指標(biāo)通量,、靈敏度,、樣品量、動(dòng)態(tài)范圍,、重復(fù)性等方面都具有優(yōu)勢(shì),，如果感興趣，可以和斑馬魚公司聯(lián)系。

技術(shù)培訓(xùn)和支持：斑馬魚（北京）科技有限公司是Olink代理商,，負(fù)責(zé)儀器和試劑的推廣銷售,，具備豐富的細(xì)胞因子和蛋白標(biāo)志物檢測(cè)方面經(jīng)驗(yàn)，可為用戶提供樣本制備,、儀器操作,、數(shù)據(jù)分析等一整套解決方案。在購(gòu)買儀器后,，將安排有資質(zhì)的工程師進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)安裝和培訓(xùn),。在培訓(xùn)完成后，客戶還將獲得支持,，包括遠(yuǎn)程技術(shù)支持（Technical Support）,、現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用科學(xué)家（FAS）、現(xiàn)場(chǎng)服務(wù)工程師（FSE）和生物信息學(xué)應(yīng)用（Applied Bioinformatics）團(tuán)隊(duì),，覆蓋實(shí)驗(yàn)工作流程,、試劑耗材、儀器和軟件的各個(gè)方面,。

七,、Olink在轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)和臨床研究中的應(yīng)用：

1、生物樣本庫(kù)進(jìn)行人群規(guī)模隊(duì)列血液蛋白組檢測(cè)
應(yīng)用案例：英國(guó)生物樣本庫(kù)和冰島deCODE中心均采用olink蛋白組平臺(tái)進(jìn)行大規(guī)模人群隊(duì)列的血液蛋白組檢測(cè),；
2,、疾病早篩及伴隨診斷蛋白標(biāo)志物的開發(fā)（IVD及LDT開發(fā)）
應(yīng)用案例：Octave公司的多發(fā)性硬化癥伴隨診斷試劑盒開發(fā)、香港葉玉如院士阿爾茲海默癥早診標(biāo)志物開發(fā),、加拿大卵巢癌診斷標(biāo)志物的開發(fā),；
3、藥物靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)驗(yàn)證
應(yīng)用案例：Scallop聯(lián)盟采用基因組數(shù)據(jù)加olink蛋白組數(shù)據(jù)進(jìn)行孟德爾隨計(jì)劃分析,，做pQTL尋找因果關(guān)系,；
4、臨床預(yù)后療效預(yù)測(cè),，病人分層&伴隨診斷標(biāo)志物開發(fā)
應(yīng)用案例：美國(guó)癌癥登月計(jì)劃將Olink公司的Immuno-Oncology panel為腫瘤免疫.治療中第一梯隊(duì)的檢測(cè)方法,，主要用于免疫療法的安全性及有效性評(píng)估；
5,、免疫類組學(xué)研究
應(yīng)用案例：近期新.冠炎癥反應(yīng)相關(guān)文章,，自身免疫病，多組學(xué)聯(lián)用研究免疫系統(tǒng),，早產(chǎn)兒,、新生兒免疫系統(tǒng)發(fā)育評(píng)估等等；
6,、分泌組學(xué)研究（主要用于細(xì)胞培養(yǎng)上清中蛋白因子檢測(cè)）：
應(yīng)用案例：無(wú)創(chuàng)胚胎評(píng)估技術(shù),、細(xì)胞系藥物實(shí)驗(yàn)等
7,、新技術(shù)應(yīng)用開發(fā)
應(yīng)用案例：CTC細(xì)胞及稀有細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄&蛋白質(zhì)組研究，外泌體的蛋白質(zhì)組研究,，生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)等。

八,、技術(shù)參數(shù)：

1,、功能用途：可以對(duì)細(xì)胞因子及蛋白標(biāo)志物進(jìn)行超微量、低豐度,、超高靈敏度的多重檢測(cè),；廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)科學(xué)、轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué),、藥物開發(fā),、臨床試驗(yàn)、生物樣本庫(kù)和人群大隊(duì)列研究,；也可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)方案開發(fā)和優(yōu)化,，有利于生理狀態(tài)評(píng)估、藥物安全性有效性評(píng)估,、診斷及療效預(yù)測(cè)標(biāo)志物開發(fā),，適合科研創(chuàng)新和開創(chuàng)性研究；
2,、樣品類型：血漿,、血清、腦脊液,、淚液,、肺泡灌洗液、尿液,、外泌體裂解液和細(xì)胞提取物等,；
3、儀器為一體化設(shè)計(jì),，觸屏操作,，采用微流控技術(shù)自動(dòng)構(gòu)建納升級(jí)反應(yīng)體系；
4,、最小上樣量：≤1ul血漿或其它體液樣本,；
5、多重檢測(cè)：1ul樣本可同時(shí)檢測(cè)≥92種細(xì)胞因子,；
6,、靈敏度：fg/ml，發(fā)現(xiàn)不易檢測(cè)的蛋白標(biāo)志物,；
7,、動(dòng)態(tài)范圍：10 log（fg/ml-ug/ml），可同時(shí)在一個(gè)體系里檢測(cè)低表達(dá)和高表達(dá)的蛋白靶標(biāo)；
8,、可檢測(cè)指標(biāo)數(shù)：每個(gè)樣本可檢測(cè)蛋白指標(biāo)數(shù)≥1000個(gè),；
9、高重復(fù)性：CV值小于10%,；
10,、高特異性：基于PEA技術(shù)，克服了多重免疫檢測(cè)中抗體交叉反應(yīng)及信號(hào)串?dāng)_問(wèn)題,；
11,、溫控范圍：4–99 ºC；
12,、抗體孵育：待檢測(cè)蛋白的抗體與樣本在同一個(gè)孔中完成均相孵育,，無(wú)需洗板和包被；
13,、絕對(duì)定量：可以進(jìn)行絕對(duì)定量,；
14、發(fā)表文獻(xiàn)≥1000篇,。

九,、斑馬魚（北京）科技有限公司，是Olink的經(jīng)銷商,，負(fù)責(zé)超微量高靈敏靶向蛋白組分析儀的推廣銷售和技術(shù)支持,，為您提供儀器的參數(shù)、價(jià)格,、選型,、技術(shù)原理等信息，更多相關(guān)信息可留言或咨詢,。