EZ Trans Pro細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑（GMP）

產(chǎn)品描述
EZ Trans Pro細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑（GMP）,，作為新一代的轉(zhuǎn)染試劑，其轉(zhuǎn)染原理是帶正電的陽(yáng)離子聚合物與核酸中帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,，并通過(guò)胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞,。
本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)李記生物的優(yōu)化處理，具有轉(zhuǎn)染效率高,，細(xì)胞毒性低,，操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好,，適用范圍廣等特點(diǎn),。
訂購(gòu)信息

運(yùn)輸與保存
藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃保存,，有效期12個(gè)月,。【注】：不可冷凍！
使用方法（以 24 孔板為例,，其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請(qǐng)參考表1）
1. 接種細(xì)胞
對(duì)于貼壁細(xì)胞,，轉(zhuǎn)染前18-24 h進(jìn)行鋪板（不含抗生素），使其在轉(zhuǎn)染時(shí)的密度大約在80%左右,。對(duì)于懸浮細(xì)胞,，轉(zhuǎn)染當(dāng)天，配制EZ Trans-DNA復(fù)合物之前進(jìn)行鋪板,，每500 µL生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入4~8×10⁵cells,。  
【注】：培養(yǎng)液中的血清不影響轉(zhuǎn)染效率,。轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類(lèi)型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響，建議初次使用時(shí)設(shè)置梯度進(jìn)行優(yōu)化最佳使用量,。
2. 準(zhǔn)備EZ Trans-DNA復(fù)合物
（1）對(duì)于每孔細(xì)胞,，將1 μg質(zhì)粒DNA稀釋到40 μL無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yǎng)基），混勻,。
（2）對(duì)于每孔細(xì)胞,，將3 μL EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑稀釋到40 μL無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yǎng)基），輕輕混勻,。
【注】：無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基是稀釋液,，不能使用含血清的培養(yǎng)基進(jìn)行DNA和EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑的稀釋。因?yàn)?/span>EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過(guò)程不能含有血清,。
（3）將稀釋好的EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中，輕輕混勻,。
【注】：此混合的順序不能反向進(jìn)行,。
（4）室溫放置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA復(fù)合物,。
3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞
（1）將上述80 μL EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細(xì)胞的培養(yǎng)皿中,。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿或輕微振蕩，讓EZ Trans-DNA復(fù)合物分散均勻,。
（2）在37℃,，5% CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)6-18 h，去除含EZ Trans-DNA復(fù)合物的培養(yǎng)液,，更換新的培養(yǎng)液,，繼續(xù)培養(yǎng)至對(duì)轉(zhuǎn)入基因表達(dá)分析。
【注】：篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,，轉(zhuǎn)染細(xì)胞24 h后,，將細(xì)胞傳代至新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中（將細(xì)胞稀釋10倍以上），在37℃,，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h,，加入篩選培養(yǎng)基。在有轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下,，約 1～2周可篩選到耐藥性克隆,，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
 
注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域。

2. 質(zhì)粒質(zhì)量：請(qǐng)務(wù)必使用高純度無(wú)內(nèi)毒素轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒,。通過(guò)260 nm光吸收測(cè)定DNA 濃度,，260 nm / 280 nm比值確定 DNA 純度（比值應(yīng)該在1.8～2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性,。

3. 細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞,。確保細(xì)胞沒(méi)有被細(xì)菌、真菌或支原體污染,。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用胎牛血清（貨號(hào)：AC03L055）培養(yǎng)細(xì)胞,。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)液要求：EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染,，并且轉(zhuǎn)染前不需要換培養(yǎng)基。但是,，制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑,，因?yàn)檠鍟?huì)影響復(fù)合物的形成。確保細(xì)胞培養(yǎng)液沒(méi)有被細(xì)菌,、真菌或支原體污染,。轉(zhuǎn)染時(shí)培養(yǎng)液中不添加抗生素。

5. DNA濃度和EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑量的優(yōu)化：DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類(lèi)型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響,，初次使用應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑量以得到最大的轉(zhuǎn)染效率,。使用者可嘗試每 1 μg DNA使用 1～4 μL體積EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例,，通常推薦是1:2~1:5,。
    
   表1：不同培養(yǎng)體積對(duì)應(yīng)的待轉(zhuǎn)DNA、EZ Trans,、稀釋液用量

【注】：該表使用量?jī)H供參考,，具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型及其他實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。使用時(shí)DNA（μg）: EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑（μL）比值保持在1:2~1:5,。

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