?SeraCare (KPL) 熒光標記二抗
- 公司名稱 北京西美杰科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 ?SeraCare (KPL)
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- 廠商性質 代理商
- 更新時間 2022/8/4 16:24:03
- 訪問次數(shù) 1052
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Seracare(KPL)熒光標記二抗
一般來講,偶聯(lián)到二抗上的探針主要有酶(辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,,PAP),,熒光基團(FITC, RRX, TR, PE, Rhodamine)和生物素。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗,,對于Western Blot和ELISA,,常用的二抗是酶標二抗;而細胞或組織標記實驗(細胞免疫化學,,組織免疫化學,,流式細胞術)中通常使用熒光標記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測信號,,可以使Biotin/Avidin檢測系統(tǒng),。其中熒光素是具有光致熒光特性的染料,熒光染料種類很多,,目前常用于熒光標記二抗的主要有以下幾種:
異硫氰酸熒光素-Fluorescein Isothiocyanate (FITC)
FITC純品為黃色或橙黃色結晶粉末,,易溶于水和酒精溶劑。FITC分子量為389.4,,最大吸收光波長為490~495nm,,最大發(fā)射光波長為520~530nm,呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光,。FITC在冷暗干燥處可保存多年,,是目前應用廣泛的熒光素。由于FITC是小分子化合物,,每一個抗體可標記幾個FITC分子,,IgM通常用小分子的熒光素標記,如FITC,、Cy3/5,、Texas Red等。FITC熒光二抗主要優(yōu)點是人眼對黃綠色較為敏感,,通常切片標本中的綠色熒光少于紅色,。然而FITC的缺點是淬滅快,因此要和抗淬滅劑一起使用,。
四甲基異硫氰酸羅丹明-Tetramethyl Rhodamin Isothiocyanate(TRITC),,Rhodamine Red-X(RRX), Texas Red(TR)
這些羅丹明的衍生物耦聯(lián)基團具有不同的吸收波長 (550, 570, 596nm)和最大發(fā)射波長(570, 590, 620nm)。在使用裝有氪氬燈的激光共聚焦掃描顯微鏡作三標記的實驗時,,RRX尤其有用,,可以和Cy2(或者FITC)和Cy5一起使用,因為RRX的發(fā)射波長在Cy2和Cy5中間,,而且和這兩者覆蓋都很少,,氪氬燈激發(fā)光為488nm,598nm和647nm,,分別是Cy2(FITC), RRX和Cy5的理想激發(fā)波長,。因為FITC和PE可以被氬燈的488nm波長激發(fā), 在流式細胞儀中用FITC作雙標,另一種用藻紅蛋白(PE)耦聯(lián)基團要比羅丹明好,。TRITC為羅丹明的衍生物,,呈紫紅色粉末,,較穩(wěn)定,最大吸收光波長為 550nm,,最大發(fā)射光波長為620nm,,呈現(xiàn)橙紅色熒光,與FITC的綠色熒光對比鮮明,,可配合用于雙重標記或對比染色,。因TRITC熒光淬滅慢,也可用于單獨標記染色,。
菁類染料-Cyanine dyes(Cy2, Cy3, Cy5)
Cy2耦聯(lián)基團激發(fā)波長為492nm,,發(fā)光波長為510nm的綠色可見光。Cy2和FITC使用相同的濾波片,。由于Cy2比FITC在光下更穩(wěn)定,,要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片劑,因為這種抗淬滅劑和Cy2反應,,在染色片儲存后會導致熒光微弱和擴散,。Cy3和Cy5比其他的熒光團探針要更亮,更穩(wěn)定,,背景更弱,。Cy3耦聯(lián)基團激發(fā)光的最大波長為550nm,發(fā)射光為570nm,。因為激發(fā)光和發(fā)射光波長很接近TRITC, 在熒光顯微鏡中,,可使用和TRITC一樣的濾波片。Cy3在氬光燈(514nm或528nm)下可以被激發(fā)出50%的光強,,在氦氖燈(543nm)或者汞燈(546nm)下則約75%,。Cy3可以和熒光素一起作雙標。Cy3還可以和Cy5一起在共聚焦顯微鏡實驗中作多標記,。Cy5耦聯(lián)基團的激發(fā)波長最大650nm,,發(fā)光波長最大670nm。在氪氬燈(647nm)下它們可被激發(fā)出98%的熒光,,在氦氖燈下(633nm)為63%,。Cy5可以和很多其他的熒光基團一起用在多標記的實驗中。由于它的最大發(fā)射波長在670nm,,Cy5很難用裸眼觀察,,而且不能用汞燈作理想的激發(fā)。通常觀察Cy5時采用具有合適激發(fā)光和遠紅外檢測器的共聚焦顯微鏡,,在水相封片劑中應當加入抗淬滅劑,。使用傳統(tǒng)的表面熒光顯微鏡時,不推薦使用Cy5。
藻紅蛋白或藻膽色素蛋白-Phycoerythrin(PE)
存在于被稱為藻紅的多聚微粒中,,位于葉綠素的反應中心,,在自然結構中,藻紅蛋白吸收光能,,吸收后轉化成能量,,供其發(fā)育生長。當藻紅蛋白被分離和純化后,,其蛋白質變得具有很強的熒光,能吸收不同波長的光,,發(fā)出亮紅色的熒光,,此時不再接受任何外來的光,也不能轉移光能,。藻紅蛋白PE的吸收波長范圍較廣,,最大的吸收波長為566nm,最大的發(fā)射波長為574nm,。藻紅蛋白作為熒光標記物具有以下優(yōu)點:首先具有強的長波長激發(fā)和發(fā)射熒光,,可避免來自其他生物材料熒光的干擾;另外PE具有非常高的水溶性而且與許多生物學或合成材料的多位點穩(wěn)定交聯(lián),。
注:由于觀察熒光需要一定波長的激發(fā)光,,必須根據(jù)實驗室已有的儀器可發(fā)光的波段進行選擇。另外注意多標記中對探針色彩區(qū)分程度的要求,,例如,,若丹明紅-X (RRX)和德克薩斯紅(TR)熒光素的區(qū)別就比四甲基若丹明(TRITC)或者Cy3的區(qū)別明顯。如果對靈敏度有更高的要求,,則Cy3和Cy5就比其他的熒光團探針要亮,。
Seracare(KPL)熒光標記二抗
西美杰代理的專業(yè)二抗和底物生產廠商Seracare(KPL)提供豐富的熒光標記二抗,可檢測抗人,、大鼠,、小鼠、豬,、驢,、綿羊、山羊,、小雞,、馬、兔,、倉鼠,、狗、牛,以及多種細菌類等物種,;另外,,還有IgG、IgA,、IgM以及IgG(Fc),、IgG(ab’)2等不同類型抗體。小編下面匯總了部分常用熒光二抗:
FITC | TRITC | Cy3 | Cy5 | PE | |
抗人 | 5230-0425 | - | 5230-0355 | 5230-0370 | - |
抗小鼠 | 5230-0427 | 5230-0336 | 5230-0364 | 5230-0376 | - |
抗大鼠 | 5230-0301 | - | 5230-0361 | - | - |
抗豚鼠 | 5230-0303 | - | - | - | - |
抗兔 | 5230-0426 | 5230-0332 | 5230-0359 | 5230-0372 | - |
抗豬 | 5230-0297 | - | - | - | - |
抗山羊 | 5230-0294 | - | 5230-0358 | 5230-0371 | - |
抗鹿 | 5230-0329 | - | - | - | - |
抗火雞 | 5230-0327 | - | - | - | - |
抗雞 | 5230-0325 | - | - | 5230-0379 | - |
抗鴨 | 5230-0326 | - | - | - | - |
抗馬 | 5230-0320 | - | - | - | - |
抗貓 | 5230-0317 | - | - | - | - |
抗狗 | 5230-0314 | - | - | - | - |
抗牛 | 5230-0293 | - | - | - | - |
鏈和親霉素 | 5270-0028 | - | 5270-0022 | 5270-0023 | 5270-0021 |
注:表格數(shù)字部分為產品貨號
西美杰公司是的SeraCare (KPL)代理中國區(qū)總代理,,同時還是Applichem代理,,KERRY代理,Pfanstiehl代理,,Cygnus代理,,c-LEcta DENARASE®代理,ValitaCell代理,,Lifespan(LSBio)代理,,Phytotech代理,Agrisera代理,,Cali-Bio代理Jena Bioscience代理,,Immundiagnostik代理,Advanced BioMatrix代理,,Mirus代理,,Alzet代理Genetics代理,Cell Biolabs代理,,MYOCEA代理,,Gropep代理,MyBioSource代理,,Hampton代理,,LeeBio代理,Cal Bioreagents代理,,Everest Biotech代理,,Nordic-Mubio(SCICONS)代理,Exalpha代理,,SCIGEN代理,,MiTeGen代理,Prospec代理,,博百歐代理,,歡迎大家咨詢訂購。