檢測原理

   本試劑盒由預(yù)包被小反芻病毒重組蛋白的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測羊血清、血漿樣本中小反芻病毒抗體,。實(shí)驗(yàn)時在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有小反芻病毒抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后,；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,，在孔中加TMB底物液，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色,；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有小反芻病毒抗體。

試劑盒組成

儲存及有效期

2～8℃保存,，有效期12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存,，避免受潮。使用期限為2個月,。

適用儀器

含450nm波長的酶標(biāo)儀,，37℃恒溫設(shè)備,，可調(diào)微量移液器,。

樣品準(zhǔn)備

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮,，無溶血,、無污染,。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存,，長期需置-20℃保存,。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按50倍稀釋（如4μl血清加入196μl樣品稀釋液中,，混勻）陰性,、陽性對照不用稀釋,。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水加1份濃縮洗滌液),。

檢驗(yàn)方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條,，設(shè)陰性,、陽性對照各1孔，未用的板條盡快密封,，2～8℃保存,。

3.陰性,、陽性對照孔分別加入陰性,、陽性對照100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻,，蓋好蓋板膜,，置37℃溫箱孵育30分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體,，每孔加250ul工作洗滌液,，用震蕩混勻的方式洗滌60秒后棄去,，重復(fù)洗滌5次,，每次洗滌后需拍干液體,。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

7.甩去孔內(nèi)液體，每孔加250ul工作洗滌液,，用震蕩混勻的方式洗滌60秒后棄去，重復(fù)洗滌5次,，每次洗滌后需拍干液體。

8.根據(jù)樣本數(shù)量將顯色液A與顯色液B按等體積比例混勻配置為底物工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用。每孔加100ul,，置37℃避光反應(yīng)10分鐘,。

9.每孔加終止液100μl，混勻,，于450nm 測定各孔吸光值（OD值）,，

參考值

實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陽性對照OD-陰性對照OD＞0.2,。

檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

1. S/P＝(樣本OD-陰性對照OD)/(陽性對照OD-陰性對照OD),。

2. S/P≥0.4時結(jié)果判讀為陽性。

3. 0.2＜S/P＜0.4時結(jié)果考慮可能存在抗體效價不足或疑似感染,。

4. S/P＜0.2時結(jié)果判讀為陰性,。

試驗(yàn)方法的局限性

1. 本試劑盒僅作為定性檢測羊血清、血漿中小反芻病毒抗體的粗略評估,。

2. 本試劑盒僅供研究使用,，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)

1.實(shí)驗(yàn)操作時需戴手套,、穿工作衣,，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

2.終止液具有腐蝕性,，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存,。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復(fù)至室溫以溶解,。

5.洗滌時各孔均需加滿液體,，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮,。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。

8.不同批號試劑組分不得混用。