一,、產(chǎn)品介紹

人中性粒細(xì)胞擴增試劑盒是為在體外培養(yǎng)和擴增人中性粒細(xì)胞而專門設(shè)計的一款含血清培養(yǎng)基套裝,。該試劑盒可在21天內(nèi)誘導(dǎo)人CD34+造血干/前體細(xì)胞分化擴增為中性粒細(xì)胞，總擴增效率達(dá)400-600倍,，是研究人中性粒細(xì)胞分化,、擴增和功能、以及大量產(chǎn)生人中性粒細(xì)胞的重要培養(yǎng)系統(tǒng),。

二,、產(chǎn)品特點

針對人中性粒細(xì)胞的活化和擴增而設(shè)計

三、產(chǎn)品成分

其他本試劑盒未提供但需用的重要試劑和組分

人CD34+細(xì)胞磁珠分選試劑

人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴增試劑盒（東嶺生物，Catalog # CS-20008-50）

四,、培養(yǎng)基配制

(在無菌生物安全柜中,，開展以下操作)

1.在4℃冰箱解凍補充因子和胎牛血清，混勻后使用,。

★注：解凍后的補充因子和血清可放置于4oC冰箱,，在1個月內(nèi)使用；或者分裝至合適體積后,，保存于-20℃冰箱,，不可反復(fù)凍融！

2.擴增培養(yǎng)基配制：將1體積的擴增補充因子和10體積的血清加入到89體積的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,，充分混勻,，得到人中性粒細(xì)胞擴增培養(yǎng)基。如取100ul補充因子和1ml血清加入至8.9ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，以此類推,。

★注：配好的*培養(yǎng)基請于4oC保存，且于1個月內(nèi)使用完畢,。

五,、使用說明

請詳細(xì)閱讀使用說明后再開始相關(guān)實驗。

1.D0：使用磁珠分選人CD34+造血干/前體細(xì)胞（參考所使用試劑盒的說明書）,，計數(shù),。

★注：G-CSF富集的健康供體每100ml外周血中約含有5*10^5CD34+造血干/前體細(xì)胞。

2.按照人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴增試劑盒（東嶺生物,，Catalog # CS-20008-50）說明書配制人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴增培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞,，調(diào)整細(xì)胞密度至2.5*10^4/ml,，按照如下表格所示將細(xì)胞鋪于培養(yǎng)板：

 3.將培養(yǎng)板置于細(xì)胞培養(yǎng)箱，37℃,，5%CO2,，靜置培養(yǎng)。

4.D3：半量換液,。小心貼培養(yǎng)板側(cè)壁用槍尖吸走1/2體積舊培養(yǎng)基,，補充加入新鮮人CD34+造血干/前體細(xì)胞擴增培養(yǎng)基至初始培養(yǎng)體積（步驟2表格）。

★注：*培養(yǎng)基請恢復(fù)至室溫后使用,，減少對細(xì)胞的刺激

5.D6：收集細(xì)胞,，離心，300g,，5分鐘,。

6.使用人中性粒細(xì)胞擴增*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，調(diào)整密度至5*10^5/ml，將細(xì)胞鋪于合適培養(yǎng)容器中,，于細(xì)胞培養(yǎng)箱,，37℃，5%CO2,，靜置培養(yǎng),。

7.D7-D20：按照需求擴增培養(yǎng)人中性粒細(xì)胞，傳代時細(xì)胞鋪板密度維持在5*10^5/ml,，保持培養(yǎng)過程中細(xì)胞培養(yǎng)密度低于2*10^6/ml.

8.D20：收集懸浮細(xì)胞,，即為人中性粒細(xì)胞群體，可根據(jù)需求開展后續(xù)實驗,。

★注：擴增過程中,，密切關(guān)注細(xì)胞擴增狀態(tài)，如細(xì)胞密度過大可能造成細(xì)胞狀態(tài)不可逆損傷及細(xì)胞碎片的增多,；

D7-D20期間,，平均3天傳代一次，可根據(jù)細(xì)胞具體狀態(tài)調(diào)整,。

六,、數(shù)據(jù)展示

圖：人中性粒細(xì)胞擴增培養(yǎng)鑒定。分選人CD34+造血干/前體細(xì)胞按照上述說明培養(yǎng)中性粒細(xì)胞,，不同時間點收集細(xì)胞進(jìn)行總細(xì)胞擴增分析,，培養(yǎng)第20天時收集懸浮細(xì)胞進(jìn)行表型鑒定及分析。