德國徠卡 共聚焦顯微鏡 STELLARIS DIVE 光譜式多光子顯微鏡

多色多光子顯微鏡讓您更接近真像

多個不同熒光標(biāo)記的組合越來越多地用于研究細(xì)胞和分子之間的動態(tài)相互作用和空間關(guān)系,。 目的是理解各種各樣復(fù)雜的生物事件，例如細(xì)胞連通性,、細(xì)胞表型檢測,、蛋白質(zhì) 相互作用或者蛋白共表達(dá)和共定位。 要將這類研究擴大到整個器官或組織,，需要合適的大體積多色顯微鏡學(xué)方法,。 現(xiàn)在，DIVE 和 STELLARIS 相結(jié)合,，為您提供靈活的多色多光子成像的強大性能,。 而且，您還可以通過額外的無標(biāo)記成像功能擴展實驗的潛力,。

德國徠卡 共聚焦顯微鏡 STELLARIS  DIVE 光譜式多光子顯微鏡可無縫集成到共聚焦軟件界面中,，提供快速且出色的導(dǎo)航功能 ，可輕松研究復(fù)雜樣本中的動態(tài)過程,。STELLARIS DIVE——為您的研究提供各種可能性,。

強大的在體分析能力，較之前提供更多細(xì)節(jié)

STELLARIS  DIVE 可為您提供深度超過 1 毫米的靈活多色成像,。 使用 4Tune 光譜可調(diào)非退掃描檢測器,，最多可同時定義四個檢測波段，或者在發(fā)射光譜中的任何區(qū)域先后成像時獲得無限數(shù)量的熒光團(tuán),。 您可以根據(jù)所需的熒光團(tuán)組合進(jìn)行靈活調(diào)節(jié),。 使用 STELLARIS 8 DIVE ，您可以通過超過 10 億個熒光團(tuán)組合進(jìn)行多光子實驗,，您能夠更詳細(xì)地研究復(fù)雜的過程,，例如神經(jīng)元連通性、器官結(jié)構(gòu),、動態(tài)相互作用或者細(xì)胞和蛋白質(zhì)的空間關(guān)系,。

利用 STELLARIS  DIVE,，您可以通過四種或更多顏色研究活體樣本中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移、區(qū)分相關(guān)蛋白,、觀察清醒小鼠的海馬體活動或者固定的厚腸切片的結(jié)構(gòu),！

傳統(tǒng)的二向色鏡一直無法最佳區(qū)分所有熒光團(tuán)，但是現(xiàn)在利用光譜探測器可以輕松地實現(xiàn)這一點,，因為我們可以真正做到為每個熒光團(tuán)優(yōu)化您要探測的波長,。

荷蘭癌癥研究所（荷蘭阿姆斯特丹） Jacco van Rheenen 教授/博士。

活小鼠大腦皮層的神經(jīng)元（GFP,，綠色）和小膠質(zhì)細(xì)胞（YFP,，黃色）帶有遺傳標(biāo)記，星形膠質(zhì)細(xì)胞通過磺酰羅丹明（藍(lán)色）標(biāo)記,，在尾靜脈中注射 Alexa680-Dextran 將血管染色（紅色）。 整體約 250 x 250 x 250 µm,。 樣本由德國神經(jīng)退行性疾病研究中心光學(xué)顯微鏡設(shè)備部門（德國波恩）提供,。

輕松使用 DIVE——4Tune 檢測器

4Tune 非退掃描檢測系統(tǒng) 可以配備 2 至 4 個檢測器，并且可自由配置混合檢測器 (Power HyD NDD),、光電倍增管 (PMT) 或?qū)烧呓Y(jié)合使用,。 發(fā)射光通過可變二向色鏡和帶通濾波器的組合方法分離。 在整個可見光光譜（380 - 800 納米）范圍內(nèi)自由調(diào)節(jié)您的檢測范圍,！

使用 4Tune 用戶界面,，可以通過簡單的拖放操作來優(yōu)化多個轉(zhuǎn)基因標(biāo)志物的發(fā)射光設(shè)置。 用戶界面設(shè)計清晰直觀,，操作非常簡單,，幾乎無需培訓(xùn)。

使用 STELLARIS  DIVE,，您能夠為任何現(xiàn)有的和新開發(fā)的轉(zhuǎn)基因標(biāo)志物做好準(zhǔn)備,，而且可以適應(yīng)未來的新發(fā)展！

上圖： 4Tune 非退掃描檢測系統(tǒng)： 1) 可變二向色鏡 (VD),。 2) 可變帶通 (VB),。 3) Power HyD NDD 或 PMT。 下圖： 直觀的 4Tune 用戶界面,，可輕松設(shè)置 380 至 800 納米的所有顏色的檢測窗口,。

深入探索新維度

使用 STELLARIS  DIVE，您能夠靈活調(diào)節(jié)實現(xiàn)更深層更細(xì)微觀察,。 使用新型可變光路擴束鏡 (VBE),，您可針對任何物鏡對所有激發(fā)光束進(jìn)行獨立優(yōu)化調(diào)節(jié)。

VBE 能夠根據(jù)您的研究問題優(yōu)化共定位,，并實現(xiàn)分辨率和深度之間的良好平衡,。

小鼠大腦皮層,，Thy1-eYFP。 使用“深度優(yōu)先”設(shè)置將穿透深度增加 20%,。 IRAPO 25x1.0 W motCorr. 樣本由德國神經(jīng)退行性疾病研究中心光學(xué)顯微鏡設(shè)備部門（德國波恩）Kevin Keppler 提供,。

使用可變光路擴束鏡優(yōu)化深度和分辨率

徠卡可變光路擴束鏡 (VBE) 將可調(diào)光束直徑與可調(diào)發(fā)散度相結(jié)合。 為您提供可調(diào)深度,、分辨率和全色校正,。

可調(diào)光束直徑可實現(xiàn)分辨率與深度之間的平衡優(yōu)化

STELLARIS DIVE 能夠根據(jù)您的樣本要求進(jìn)行調(diào)節(jié)。 使用可變擴束鏡,，您可以選擇： 優(yōu)化分辨率——光束充滿物鏡后孔徑,，以及優(yōu)化穿透深度——光束直徑稍稍小于物鏡后孔徑。 后孔徑未充滿會使焦點體積增大,、光程縮短,，從而增大有效激發(fā)。

可調(diào)光束發(fā)散可實現(xiàn)全色校正

我們的 IR APO 物鏡在紅外波段上不會出現(xiàn)色差,。 配備 STELLARIS 8 DIVE,，您就可以使用適合紅外線以及多條紅外激光線的物鏡： 可變光路擴束鏡可用于校正色差，完成更實用的多色實驗,。

可調(diào)式可變光路擴束鏡 (VBE)

通過無標(biāo)記成像功能擴展體內(nèi)深度實驗的潛力

膠原蛋白和彈性蛋白等分子在癌癥等疾病中起到相關(guān)作用,。 我們的 4 tune 檢測器可使用二次和三次諧波產(chǎn)生信號，無需染色即可研究這些重要結(jié)構(gòu),。

DIVE 與 STELLARIS 相結(jié)合,，還可使用熒光固有的壽命信息。 借助這種能力,，您可以通過 NADH 或 FAD 的壽命成像進(jìn)行實驗,，例如進(jìn)行樣本代謝繪圖。

五彩斑斕的小鼠小腸：膠原蛋白 1 顯示為灰色（無標(biāo)記 SHG）,，譜系追蹤干細(xì)胞顯示為青色,、綠色、黃色和紅色,。干細(xì)胞在生物體內(nèi)癌癥的傳播中發(fā)揮著重要作用,。樣品由荷蘭癌癥研究所的 Jacco van Rheenen 提供。

輕松在組織中導(dǎo)航,，無需額外染色

在組織中導(dǎo)航通常需要使用導(dǎo)向標(biāo)志來了解感興趣區(qū)域的位置,。 膠原蛋白的支架特性有助于在組織中導(dǎo)航并找到感興趣區(qū)域，且無需復(fù)染,。

大多數(shù)生物組織含有膠原蛋白,，它是結(jié)締組織的主要成分。 例如,，腸被一層膠原蛋白包裹,。 通過精確采集 ? 激發(fā)波長的發(fā)射信號,，可以在多光子顯微鏡下輕松觀察膠原蛋白。 通過 4Tune 靈活的檢測窗口,，可使用任何波長采集這類信號,，無需額外的標(biāo)記或工作。

一旦顯微鏡學(xué)家找到膠原蛋白結(jié)構(gòu),，她就知道她感興趣的組織（這里是腸道干細(xì)胞）在附近了,。
五彩斑斕的小鼠小腸：來自 SHG，灰色表示膠原蛋白 1,，青色,、綠色、黃色和紅色譜系示蹤干細(xì)胞,。樣品由荷蘭癌癥研究所的 Jacco van Rheenen 提供,。

將多光子成像和熒光壽命信息相結(jié)合，研究代謝變化

代謝變化可能是組織健康的重要標(biāo)記,。

STELLARIS  DIVE 可提供 TauSense 的所有優(yōu)勢,，后者是一套基于熒光壽命的成像工具。 當(dāng)細(xì)胞的代謝狀態(tài)發(fā)生變化時,，可通過 NADH 等分子的熒光壽命變化來顯現(xiàn)出來。 NADH 在糖的新陳代謝中起到主要作用,，其熒光壽命取決于葡萄糖濃度,。 在引起葡萄糖分解的生物化學(xué)反應(yīng)中會發(fā)生構(gòu)象變化，這種變化會改變 NADH 熒光壽命,。

STELLARIS  DIVE 可與 FAst Lifetime COntrast（FALCON）結(jié)合使用,，進(jìn)行全定量熒光壽命分析。

被培養(yǎng)的 HeLa 細(xì)胞用葡萄糖處理前后的 NADH 自體熒光,。 左：使用 TauContrast 的定性結(jié)果,。 右：使用 FALCON 中的相量圖進(jìn)行的定量分析。

為多光子實驗增加額外維度

自發(fā)熒光是組織中內(nèi)源性熒光團(tuán)（例如 NADH 或 FAD 等小分子或組織結(jié)構(gòu)）發(fā)射的自然熒光,。 它在樣本成像時經(jīng)常會導(dǎo)致問題,。 但是，如果您能發(fā)揮它的優(yōu)勢呢,？

現(xiàn)在,，將 DIVE 和 TauSense 相結(jié)合，可以通過壽命信息進(jìn)行分離,，從自發(fā)熒光信號中獲得有價值的信息,。 這一功能為您提供了一個額外的渠道，從而能夠從寶貴的樣本中獲得更多信息,。

使用 RapidClear 透明化處理的腎臟切片并使用多光子激發(fā)成像,。第一個圖像是強度圖像,，第二個是 TauContrast（850 nm 激發(fā)），第三個來自四個光譜通道,，其中紅色表示血管（AF488,，920 nm 激發(fā)）、灰色表示膠原蛋白 (SHG),、綠色表示神經(jīng)細(xì)胞（SytoxOrange,，1040 nm 激發(fā)）和藍(lán)色表示色核（AF633，1100 nm 激發(fā)）,。由 SunJin 實驗室提供,。

STELLARIS 的軟件功能提高工作效率

多光子系統(tǒng)通常使用嚴(yán)格，需要根據(jù)每個實驗和用戶進(jìn)行調(diào)整,。 此外還有使用活體動物或新移植組織工作的壓力,，您很快就會了解進(jìn)行多光子實驗時功能靈活性帶來的優(yōu)勢。 STELLARIS 軟件中無縫集成了多光子功能,，STELLARIS 8 DIVE 可為您提供涵蓋從實驗設(shè)置到最終結(jié)果的輕松,、無憂的工作流程。

使用 ImageCompass 順利設(shè)置實驗

使用 LAS X Navigator 在樣本上找到感興趣區(qū)域的直觀方法

通過動態(tài)信號增強提高速度和分辨率

直徑 3.5 mm 的腸道切片,，用 RapidClear 透明化并用 Navigator 成像：黑白：SHG – 膠原蛋白,；藍(lán)色：Sytox Orange – 細(xì)胞核；綠色：Alexa 633 – 神經(jīng)細(xì)胞,；紅色：Alexa 488 – 血管,。由 SunJin 實驗室提供。

使用 ImageCompass 輕松快速設(shè)置多色多光子成像實驗

STELLARIS DIVE 多光子硬件集成到 STELLARIS 的 ImageCompass 界面中,，您可以輕松定義實驗設(shè)置,，以便快速啟動。

系統(tǒng)可利用范圍廣泛的熒光團(tuán)數(shù)據(jù)庫自動定義 MP 激發(fā)和發(fā)射,。 您也可以點擊幾下鼠標(biāo)進(jìn)行手動定義,。 按序設(shè)置以及快速預(yù)覽和 3D 查看器——多色多光子成像從未如此簡單。

ImageCompass 可以控制 STELLARIS 8 DIVE 的硬件,，并允許輕松定義實驗設(shè)置,。

即時觀察重要細(xì)節(jié)，同時始終進(jìn)行樣本概覽

LAS X Navigator 是功能強大的導(dǎo)航工具,，可讓您從逐個圖像的搜索方式快速轉(zhuǎn)變?yōu)椴榭凑麄€樣本概況的模式,。 DIVE 和 STELLARIS 相結(jié)合，使您的多光子實驗效率更高,。 獲益于在大型復(fù)雜樣本中自由導(dǎo)航的功能,，通過快速概覽、多位置成像和區(qū)塊掃描獲得深度多色成像,。

輕松獲得 1 厘米長,、0.5 毫米厚的腎臟切片的拼圖,，并全面了解腎神經(jīng)細(xì)胞和膠原蛋白系統(tǒng)（此處與 TauContrast 結(jié)合使用）。

使用 LAS X Navigator 和 TauContrast 成像的腎臟切片（SunJin Labs,，用 RapidClear 透明化）,。整個切片尺寸為 10 x 7 mm，厚度為 500 µm,。藍(lán)色的較短到達(dá)時間代表膠原蛋白（SHG 信號）,，而綠色的較長值代表用 Alexa 633 染色的神經(jīng)細(xì)胞。

動態(tài)信號增強：

保持體內(nèi)快速生命過程的分辨率

活體樣本中的生命過程速度可能很快,。 然而,，動物模型中的熒光信號往往比較弱。

動態(tài)信號增強是應(yīng)對這兩種挑戰(zhàn)的解決方案,。 它可以使信號平均化,，實現(xiàn)更佳信噪比，從而獲得更高的分辨率,，同時還可適應(yīng)樣本的動態(tài)變化,。