Neuro-2a+luc小鼠腦神經(jīng)瘤細胞熒光素酶標(biāo)記

,Neuro-2a luc

貨號：YJ-0083a

價格： 3200.0

規(guī)格： 1*125ml

細胞介紹

克隆Neuro-2A是由R.J.Klebe和F.H.Ruddle經(jīng)A株白鼠的自生腫瘤建立,。該細胞產(chǎn)生大量微管蛋白，此蛋白在神經(jīng)細胞中起應(yīng)答軸漿流動的收縮系統(tǒng)作用,。

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因,。

細胞特性

1） 來源：腦神經(jīng)母細胞瘤

2） 形態(tài)：阿米巴樣干細胞

3） 含量：>1x10⁶  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

細胞篩選

該細胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細胞,，隨細胞傳代次數(shù)的增加,，其Luc熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選,。        

建議收到細胞后至少傳3代，凍存留種后再進行篩選,。

初次進行細胞篩選時,，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的*培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無細胞漂浮或者漂浮較少,，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的*培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml,。若篩選過程中,，漂浮細胞大于60%，則停止篩選,，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),，至細胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選,。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,，可停止篩選，用不含藥*培養(yǎng)基正常培養(yǎng),。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備MEM（推薦YJ-0012）培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗,，1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二．細胞處理：

1） 凍存細胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，*培養(yǎng)基重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。Neuro-2a+luc小鼠腦神經(jīng)瘤細胞熒光素酶標(biāo)記

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當(dāng)延長消化時間）,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行,。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。