HaCat+luc人永生化表皮細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記

,HaCat luc

貨號：YJ-0072a（STR（HaCat鑒定））

價格： 3200.0

規(guī)格： 1*10 ⁶ 

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞源自一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚,，角蛋白、角化細(xì)胞交聯(lián)外膜蛋白,、中間絲相關(guān)蛋白陽性,。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

細(xì)胞特性

1） 來源：正常表皮組織

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣,，貼壁生長

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用,。

細(xì)胞篩選

該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細(xì)胞，隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,，其Luc熒光強(qiáng)度會逐漸減弱,。若實驗要求需要維持熒光強(qiáng)度，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選,。        

建議收到細(xì)胞后至少傳3代,，凍存留種后再進(jìn)行篩選。

初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時,，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的*培養(yǎng)基維持培養(yǎng),，若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的*培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,，以此類推,，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,，漂浮細(xì)胞大于60%,，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),，至細(xì)胞密度約80%,，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時細(xì)胞正常增殖,，可停止篩選,，用不含藥*培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系,。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1） 準(zhǔn)備DMEM（推薦YJ-0001）培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,；雙抗,，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二．細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

4）該細(xì)胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培養(yǎng)基中生長良好,，大部分品牌的DMEM含有較高濃度的NaHCO3（3.7g/L）,，若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞時需要提高CO2濃度（7%-10%）。