HELA+luc人宮頸癌細胞 熒光素酶標記

HELA+luc HELA luciferase labeling of human cervical cancer cells ,HELA luc

貨號：YJ-0056a（STR（hela鑒定）） 

價格： 3200.0

規(guī)格： 1*10 ⁶

細胞介紹

角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性,。 有報告稱MS751細胞含有人乳頭狀瘤病毒18 (HPV-18)序列。據(jù)報道,，p53表達水平低,，pRB(成視網(wǎng)膜細胞瘤抑制因子)表達水平正常。

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因,。

細胞特性

1） 來源：宮頸腺癌

2） 形態(tài)：上皮細胞樣,，貼壁生長

3） 含量：>1x10⁶ 個/mL

4） 污染：支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

細胞篩選

該細胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細胞,，隨細胞傳代次數(shù)的增加，其Luc熒光強度會逐漸減弱,。若實驗要求需要維持熒光強度,，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。        

建議收到細胞后至少傳3代,，凍存留種后再進行篩選,。

初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的*培養(yǎng)基維持培養(yǎng),，若無細胞漂浮或者漂浮較少,，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的*培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類推,，至最高藥物濃度為5ug/ml,。若篩選過程中,，漂浮細胞大于60%，則停止篩選,，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),，至細胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選,。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,，可停止篩選，用不含藥*培養(yǎng)基正常培養(yǎng),。

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長,，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系,。

細胞用途：僅供科研使用。

細胞接收后的處理

1） 收到細胞后,，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行,，能準確判斷細胞的傳代密度,。看細胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下,，同時給剛收到的細胞拍照,，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù),。

3） 觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）,。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）,。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代 ,。

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備MEM（推薦YJ-0012）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%；雙抗1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4 . 收到細胞后首次傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，建議客戶凍存一支備用,，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:5的比例進行,。

細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。HELA+luc人宮頸癌細胞 熒光素酶標記