A549+RFP人肺癌細胞+RFP

Human lung cancer cells ,A549 RFP

貨號：YJ-0018a（STR（A549鑒定））

價格： 3200.0

規(guī)格： 1*10 ⁶

細胞介紹

該細胞系由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系,，患者為58歲白人男性。A549能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂,。

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶RFP基因,。

細胞特性

1） 來源：肺癌

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，多角形,；貼壁生長

3） 含量：>1x10⁶  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用,。

細胞篩選

該細胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RFP的細胞，隨細胞傳代次數(shù)的增加,，其RFP熒光強度會逐漸減弱,。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選,。

建議收到細胞后至少傳3代,，凍存留種后再進行篩選。

初次進行細胞篩選時,，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的*培養(yǎng)基維持培養(yǎng),，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的*培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,，以此類推,，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,，漂浮細胞大于60%,，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),，至細胞密度約80%,，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,，可停止篩選,，用不含藥*培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。 

3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行,。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

下面T25瓶為例,；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度,。一般細胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,，按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,，標注好名稱、代數(shù),、日期等信息,。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜,，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

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