沙門氏菌PCR檢測試劑盒
- 公司名稱 上海撫生實業(yè)有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產地 進口,、國產
- 廠商性質 經銷商
- 更新時間 2022/4/8 16:07:01
- 訪問次數 354
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| 供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 48T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | FS-02R6321 | 應用領域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產品僅供科研 |
參數規(guī)格：
產品名稱：沙門氏菌PCR檢測試劑盒
產品貨號：FS-02R6321
產品規(guī)格：48T
產品分類：恒溫熒光法
產品運輸：低溫運輸
實驗過程：
| 一,、試劑準備 1. DNA模板 2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有,，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA,，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計,。因此,，擴增不同的基因需要設計不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP,、dGTP,、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中,，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中,。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油,。 2．調整好反應程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴增,。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結束反應,，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。 4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油,；否則,，直接取5-10μl電泳檢測。 |
注意事項
1.整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū),、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,，各區(qū)實驗服、儀器,、耗材應獨立使用,，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭,；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜,，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置,。
2.為避免RNA降解,，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測,；樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理,。
3.每次實驗應該設置陰、陽性對照,。
4.試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻,，并應瞬時離心。
5.試劑盒內所配陰性和陽性對照在第一次使用前應全部轉移至標本準備區(qū),，并單獨存放。
6.為防止熒光干擾,，應避免裸手直接接觸PCR反應管,，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7.儀器擴增相關參數應按照本說明書相關要求進行設置,；不同批號試劑不能混用,。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None,。
9.實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄,。
T4 Polynucleotide Kinase 2500 units
T4 DNA Ligase 1000 units
T4 DNA Ligase 5x1000 units
T4 DNA Ligase, HC 5000 units
T4 DNA Ligase 200 units
T4 DNA Ligase, LC 2x500 units
T4 RNA Ligase 1000 units
Endonuclease V, T.maritima 250 units
Micrococcal Nuclease 8000 units
Exonuclease III 4000 units
RNase H 100 units
RNase H 500 units
S1 Nuclease 10000 units
Uracil-DNA Glycosylase 200 units
Uracil-DNA Glycosylase 5x200 units
DNase I, RNase-free 1000 units
DNase I, RNase-free, HC 1000 units
DNase I, RNase-free (supplied with MnCl2) 1000 units
RNase A, DNase and protease-free 10 mg
RNase T1 100000 units
RNase T1 500000 units
RNase A/T1 Mix 1 ml
Lambda Exonuclease 1000 units
Lambda Exonuclease 5000 units
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操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加,。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,，15min內,，在450nm波長處測定各孔的OD值。
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