小鼠ELISA試劑盒生物試劑的洗滌方法:
1. 自動洗板機:每孔加入洗滌液350μl,,注入與吸出間隔60秒。洗板5次,。
2. 手工洗板:甩盡孔內液體,,在潔凈的吸水紙上拍干,,每孔加洗滌液350μl,浸泡1-2分鐘,,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體,,在厚的吸水紙上拍干。洗板5次,。
生物試劑實驗開始前,,各試劑均應平衡至室溫;試劑或樣品配制時,,均需充分混勻,,并盡量避免起泡。
1.加樣:分別設空白孔,、標準孔,、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,,加樣時將樣品加于酶標板底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,。給酶標板覆膜,,37℃孵育2小時。為保證實驗結果有效性,,每次實驗請使用新的標準品溶液,。
2.棄去液體,甩干,,每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內配制),,酶標板加上覆膜,37℃溫育1小時,。
3.棄去孔內液體,,甩干,洗板 3次,,每次浸泡1-2分鐘,,大約350μl /每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內液體拍干。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內配制)100μl,,加上覆膜,,37℃溫育1小時。
5.棄去孔內液體,,甩干,,洗板5次,方法同步驟3,。
6.每孔加底物溶液100μl,,酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實際顯況酌情縮短或延長,但不可超過30分鐘,。當標準孔出現(xiàn)明顯梯度時,,即可終止)。
7.每孔加終止液50μl,,終止反應,,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同,。
8.立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值),。應提前打開酶標儀電源,預熱儀器,,設置好檢測程序,。
9.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結束。
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