非標(biāo)定量（Label-free）實(shí)驗(yàn)

非標(biāo)定量(Label-free)

非標(biāo)定量(Label-fiee) :是一種非標(biāo)記的差異蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),不需要使用同位素標(biāo)記物標(biāo)記肽段，直接根據(jù)質(zhì)譜峰的信號(hào)強(qiáng)度來(lái)對(duì)肽段或蛋白進(jìn)行相對(duì)定量,。Label-free通過(guò)HPLC分級(jí)液質(zhì)聯(lián)用對(duì)酶解肽段進(jìn)行分析. 現(xiàn)在基于質(zhì)譜的非標(biāo)定量技術(shù)主要有兩種: 一是根據(jù)一級(jí)質(zhì)譜相關(guān)的肽段峰強(qiáng)度以及峰面積等信息進(jìn)行蛋白定量,，二是根據(jù)蛋白對(duì)應(yīng)肽段的二級(jí)質(zhì)譜總數(shù)(spectral counts)進(jìn)行定量。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.蛋白前期處理,，包括去除核酸,，蛋白純化定量，SDS聚丙烯酰氨凝膠電泳;

2.蛋白質(zhì)膠內(nèi)酶切;

3.多肽純化; .

4.多肽混合物的質(zhì)譜分析,，包括質(zhì)譜鑒定和定量信息比較;

5.生信分析

結(jié)果展示

實(shí)驗(yàn)周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

1.實(shí)驗(yàn)周期: 4-6周

2.交付標(biāo)準(zhǔn):蛋白定量結(jié)果,、鑒定結(jié)果、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù),、生信分析結(jié)果(G0分析. KEGG分析等等)

需確認(rèn)的信息

1.樣本的種屬

2.樣本的類型(組織or細(xì)胞or血液)

3.樣本的數(shù)量及分組

4.分析要求

參考文獻(xiàn)

[1]HuS, Qiu N, Liu Y , et al. Identification and comparative proteomic study of quail and duck egg white protein using 2-dimensional gel electrophoresis and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight tandem mass spectrometryanalysis[J]. Poultry Science, 2016:pew033.

[2] Bouvet M , Turkieh A,，Acosta-Martin A E , et al. Proteomic Profiling of Macrophages by 2D Electrophoresis[J]. Journal

of Visualized Experiments, 2014(93).