產(chǎn)品名稱：大鼠胰島素ELISA試劑盒

ELISA的基本原理是：

①使抗原（或抗體）結(jié)合到某種固相載體表面,，并保持其免疫活性；

②使抗原（或抗體）與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo) 抗原（或抗體）,，而且此酶標(biāo)抗原（或抗體）既保留其免疫活性,，又保留其酶活性；

③測(cè)定時(shí)將受檢標(biāo)本（抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原（或 抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進(jìn)行反應(yīng),，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其它物質(zhì)分開(kāi)，最后結(jié)合 在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的抗體或抗原量成一定比例,；再加入酶反應(yīng)底物后,，底物被酶催化后變?yōu)橛猩a(chǎn)物，根據(jù)其顏色反應(yīng)的 深淺進(jìn)行定性或定量分析,，以了解被測(cè)標(biāo)本中抗體或抗原含量,。

ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多,，而且其操作中有一定的技術(shù)要求,，在中 除正常反應(yīng)外，有時(shí)?？梢?jiàn)到一些錯(cuò)誤結(jié)果（即假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果）,。引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素；②試 劑因素,；③操作因素,。本文就標(biāo)本因素對(duì)ELISA測(cè)定的影響做如下討論。 血清是常用的ELISA標(biāo)本,，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,，標(biāo)本引起的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致，分為內(nèi)源 性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種,。

樣品收集,、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后,，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清,。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

自備物品

1.酶標(biāo)儀（450nm）

2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

1.  試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用,。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存。

3.  濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白,；按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍,，最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

4.  嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間,、加液量及順序進(jìn)行溫育操作,。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0,、7.5,、15、30,、60,、120 pg/mL

大鼠胰島素ELISA試劑盒

試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干,，如此洗板5次,。

2.  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min,，洗板5次,。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL,；空白孔不加。

4.  除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

試劑盒性能

1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,，大于等于0.9900,。

2. 靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。

4. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%。

5. 貯藏：2-8℃,，避光防潮保存,。

6. 有效期：6個(gè)月

進(jìn)口原料,，準(zhǔn)確性高，靈敏度較高,，針對(duì)血清血漿樣本,，有專用的緩沖液，避免計(jì)算“負(fù)值”

免責(zé)聲明

1.  試劑盒僅供研究使用,，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn),，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),，本公司概不負(fù)責(zé),。

2.  嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作,，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)