雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒說明書

【用途】用于雞傳染性支氣管炎病毒核酸的檢測,。

【規(guī)格】50T/盒

【試劑】

【操作步驟】

1.雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒核酸提取  

(1) 取疑似病料（氣管及分泌物,、腎臟、肺臟等病毒靶組織）,，用PBS研磨成1：3懸液,，在-20℃凍融1次，經(jīng)12000 r/min離心3 min,，上清液-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>

（2）取200uL上清液,，移入1.5mL滅菌EP管中，加入200uLSR-I,，漩渦振蕩混合均勻,，靜置5min。

（3）加75uL TU-1,，漩渦振蕩混合均勻,，12000r/min離心5 min。

（4）將上清轉(zhuǎn)移到新的2 ml離心管（試劑盒內(nèi)提供）中,，加入300 uL SR-Ⅳ,，上下倒置6-8次，混合均勻,。

（5）將步驟4中的混合液移入制備管中（試劑盒內(nèi)提供）,，并將制備管置于同一2 ml離心管，8000 r/min離心1min,。

（6）棄濾液,，將制備管置回到2 ml離心管中,，加500 uL SR-II，室溫靜置1min,，12000 r/min離心1 min。

（7）棄濾液,，將制備管置回到2 ml離心管中,，加700 uL SR-Ⅲ，12000 r/min離心1 min,。

（8）將制備管置回到2 ml離心管中,，12000 r/min離心2min。

（9） 將制備管置于潔凈的1.5 ml離心管中（試劑盒內(nèi)提供）,，在制備管膜中央加40 uL TU-2,， 室溫靜置1 min。12000 r/min離心1 min洗脫,。洗脫液即為模板,，即用或-20℃凍存?zhèn)溆谩?/span>

2.One-Step RT- PCR加樣體系(20uL體系)

3.反應(yīng)程序

4.電泳

配制1.0%瓊脂糖凝膠，取PCR產(chǎn)物5uL,，混合1uL6xDNA Loading buffer,，加樣于凝膠孔中，同時(shí)在相鄰孔加5uL DL2000 DNA Marker,，在120-150v 電壓下,，1×TAE液中電泳15-20min，在紫外成像儀下觀察結(jié)果,。

【結(jié)果判定】

在約490bp左右位置出現(xiàn)擴(kuò)增帶,，表明雞傳染性支氣管炎病毒核酸檢測陽性；

若在490bp處沒有條帶出現(xiàn)則樣品判為陰性,。

1.標(biāo)準(zhǔn)陽性片段M.DL2000 Marker

【注意事項(xiàng)】

1. 陽性對照極易污染試驗(yàn)環(huán)境,，如果做陽性對照,吸取陽性對照槍頭妥善處理

2. -20℃保存的試劑在使用前應(yīng)*融化，振蕩混勻后 8000rpm 離心 15 秒使液體全部沉于管底,，置冰盒中取用,。嚴(yán)禁使用超過有效期限的試劑；嚴(yán)禁混用不同試劑盒組分,。

3. PCR 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按功能分為配液區(qū),、樣品處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū),、電泳區(qū),。物流方向依次為配液區(qū) →樣品處理區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→電泳區(qū)。所有接觸病料的物品,、器具,，尤其是陽性對照及PCR 產(chǎn)物和使用后的電泳緩沖液均應(yīng)合理處置,，以免污染實(shí)驗(yàn)室。

4. 嚴(yán)格按照國標(biāo)和說明書要求操作,。吸取液體時(shí)移液器吸頭盡量在液體上層吸取,，移液精確；吸取不同液體時(shí)必須更換移液器滴頭,，防止試劑組分污染以及樣品污染,。

5.試劑盒組分在生產(chǎn)分裝時(shí)考慮到液體的損耗，實(shí)際裝量略多于標(biāo)注裝量,，因此嚴(yán)禁直接在 原包裝中配制反應(yīng)體系,，以免造成反應(yīng)體系各組分比例不準(zhǔn)確。

【保存期】本制品有效期為1年,。

僅供獸醫(yī)診斷使用

長期提供原核,、真核蛋白表達(dá)構(gòu)建服務(wù)

長期 提供抗原偶聯(lián)、 HRP,、生物素,、糖基化、親和素,、FITC等偶聯(lián)標(biāo)記多肽,、抗體、抗原,、蛋白等服務(wù)