雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

【用途】用于雞傳染性支氣管炎病毒核酸的檢測(cè)。

【規(guī)格】50T/盒

【試劑】

【操作步驟】

1.雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒核酸提取  

(1) 取疑似病料（氣管及分泌物,、腎臟,、肺臟等病毒靶組織），用PBS研磨成1：3懸液,，在-20℃凍融1次,，經(jīng)12000 r/min離心3 min，上清液-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>

（2）取200uL上清液,，移入1.5mL滅菌EP管中,，加入200uLSR-I，漩渦振蕩混合均勻,，靜置5min,。

（3）加75uL TU-1,，漩渦振蕩混合均勻，12000r/min離心5 min,。

（4）將上清轉(zhuǎn)移到新的2 ml離心管（試劑盒內(nèi)提供）中,，加入300 uL SR-Ⅳ，上下倒置6-8次,，混合均勻,。

（5）將步驟4中的混合液移入制備管中（試劑盒內(nèi)提供），并將制備管置于同一2 ml離心管,，8000 r/min離心1min,。

（6）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中,，加500 uL SR-II,，室溫靜置1min，12000 r/min離心1 min,。

（7）棄濾液,，將制備管置回到2 ml離心管中,，加700 uL SR-Ⅲ,，12000 r/min離心1 min。

（8）將制備管置回到2 ml離心管中,，12000 r/min離心2min,。

（9） 將制備管置于潔凈的1.5 ml離心管中（試劑盒內(nèi)提供），在制備管膜中央加40 uL TU-2,， 室溫靜置1 min,。12000 r/min離心1 min洗脫。洗脫液即為模板,，即用或-20℃凍存?zhèn)溆谩?/span>

2.One-Step RT- PCR加樣體系(20uL體系)

3.反應(yīng)程序

4.電泳

配制1.0%瓊脂糖凝膠,，取PCR產(chǎn)物5uL，混合1uL6xDNA Loading buffer,，加樣于凝膠孔中,，同時(shí)在相鄰孔加5uL DL2000 DNA Marker，在120-150v 電壓下,，1×TAE液中電泳15-20min,，在紫外成像儀下觀察結(jié)果。

【結(jié)果判定】

在約490bp左右位置出現(xiàn)擴(kuò)增帶,，表明雞傳染性支氣管炎病毒核酸檢測(cè)陽(yáng)性,；

若在490bp處沒(méi)有條帶出現(xiàn)則樣品判為陰性。

1.標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性片段M.DL2000 Marker

【注意事項(xiàng)】

1. 陽(yáng)性對(duì)照極易污染試驗(yàn)環(huán)境,，如果做陽(yáng)性對(duì)照,吸取陽(yáng)性對(duì)照槍頭妥善處理

2. -20℃保存的試劑在使用前應(yīng)*融化,，振蕩混勻后 8000rpm 離心 15 秒使液體全部沉于管底,，置冰盒中取用。嚴(yán)禁使用超過(guò)有效期限的試劑,；嚴(yán)禁混用不同試劑盒組分,。

3. PCR 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按功能分為配液區(qū)、樣品處理區(qū),、擴(kuò)增區(qū),、電泳區(qū)。物流方向依次為配液區(qū) →樣品處理區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→電泳區(qū),。所有接觸病料的物品,、器具，尤其是陽(yáng)性對(duì)照及PCR 產(chǎn)物和使用后的電泳緩沖液均應(yīng)合理處置,，以免污染實(shí)驗(yàn)室,。

4. 嚴(yán)格按照國(guó)標(biāo)和說(shuō)明書(shū)要求操作。吸取液體時(shí)移液器吸頭盡量在液體上層吸取,，移液精確,；吸取不同液體時(shí)必須更換移液器滴頭，防止試劑組分污染以及樣品污染,。

5.試劑盒組分在生產(chǎn)分裝時(shí)考慮到液體的損耗,，實(shí)際裝量略多于標(biāo)注裝量，因此嚴(yán)禁直接在 原包裝中配制反應(yīng)體系,，以免造成反應(yīng)體系各組分比例不準(zhǔn)確,。

【保存期】本制品有效期為1年。

僅供獸醫(yī)診斷使用

長(zhǎng)期提供原核,、真核蛋白表達(dá)構(gòu)建服務(wù)

長(zhǎng)期 提供抗原偶聯(lián),、 HRP、生物素,、糖基化,、親和素、FITC等偶聯(lián)標(biāo)記多肽,、抗體,、抗原、蛋白等服務(wù)