原代細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑

一,、產(chǎn)品詳情：

Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學(xué)舊金山校區(qū)聯(lián)合開發(fā)用于哺乳動物細(xì)胞,、活體動物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑，此技術(shù)成為新的全球蛋白功能,、免疫細(xì)胞及干細(xì)胞治療,、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一。Zeta Life轉(zhuǎn)染試劑可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞,、懸浮細(xì)胞,，如:T細(xì)胞、NK細(xì)胞,、人淋巴細(xì)胞,、THP-1等；可高效率轉(zhuǎn)染siRNA到任何哺乳動物細(xì)胞;用于將 DNA 和 siRNA 轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞系和各種原代細(xì)胞中,；轉(zhuǎn)染細(xì)胞后可10小時內(nèi)快速代謝的第三代新轉(zhuǎn)染試劑,。

二、使用說明：

1,、材料準(zhǔn)備

RNA 濃度 20 uM /L

質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水,；②無內(nèi)毒素 ）

2、操作步驟

提前 1 天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在 60-80%左右,，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。

核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻,，室溫靜 止 10-15 分鐘,。

在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻,；細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清,。

細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時后對細(xì)胞進(jìn)行正常換液，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液,。

分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,，48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選,。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達(dá),。

原代細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑

三,、注意事項：

1、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水，但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer,。溶解于 Buffer 的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會下降 80%左右,，甚至?xí)D(zhuǎn)染失敗。

2,、質(zhì)粒必須去除內(nèi)毒素,，內(nèi)毒素對細(xì)胞將產(chǎn)生很大的細(xì)胞毒性，會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率下降 70%-80%左 右,，甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen、TIANGEN,、Omega 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒）,。

3、復(fù)合物的制備過程中是絕不能用其他任何試劑對核酸或轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行稀釋,，只需將核酸和轉(zhuǎn)染 試劑兩者按 1:1 比例直接混合,，如果進(jìn)行了稀釋會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失。

4,、轉(zhuǎn)染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次,，室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細(xì)胞培養(yǎng)板。

5,、轉(zhuǎn)染 24 小時后進(jìn)行正常換液,，不能像 Lipo2000 一樣轉(zhuǎn)染 4-6 小時后換液。

6,、原代細(xì)胞,、免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染時，細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基里面不能含有雙抗培養(yǎng)基,。

四,、產(chǎn)品說明：

1、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2,、包裝規(guī)格

貨號：AD600025 ,、AD600050、AD600075,、AD600150

規(guī)格：0.25ml,、0.5ml、0.75ml,、1.5ml

3,、儲存條件

常溫運輸,，4℃保存,，可保存兩年，拒絕反復(fù)凍融。

深圳市安培生物科技有限公司是美國 Zeta Life 公司的中國代理商,。Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑大量現(xiàn)貨,，均經(jīng)過反復(fù)充分驗證，轉(zhuǎn)染效果好且重復(fù)性佳,，提供完整售后服務(wù)和技術(shù)支持,。尊敬的客戶您如在訂購過程中遇到任何問題都可以與我司客戶經(jīng)理聯(lián)系尋求幫助。