載體特性 ：

類型：慢病毒基因過表達載體

基因啟動子：EF1a IE promoter

報告基因：mKate2，F(xiàn)irefly luciferase

真核細胞篩選抗性：Puromycin

原核抗性：Ampicillin

     pLV- mKate2-luci(EF1a)載體是基于 HIV1 的慢病毒基因過載體,。載體高效表達紅色熒光蛋白 mKate2和螢火蟲熒光素酶基因,，可以用于活體動物熒光成像及化學發(fā)光成像。EF1a 啟動子來自人類 靶向延長因子 1α （EF1A）基因,，可在多數(shù)種類細胞中穩(wěn)定表達,，尤其是干細胞等 CMV 啟動子會發(fā)生沉默的細胞。PGK 啟動子驅(qū)動表達 Puromycin 抗性基因,。利用本載體包裝的慢病毒將表達 Puromycin 抗性基因,，可以方便地使用 Puromycin 篩選出穩(wěn)定細胞系。

    pLV-mKate2-luci(EF1a)載體包含了生產(chǎn)慢病毒所必須的病毒原件以及提高病毒滴度及基因表達效率的原件,。載體結(jié)構緊湊,，病毒包裝效率高。

用法說明

    pLV-mKate2-luci(EF1a)載體與包裝載體共轉(zhuǎn)染 HEK293T 細胞后（包裝體系貨號 KLV3501 和 KLV3502）,，產(chǎn)生高滴度復制缺陷的慢病毒顆粒,，可以直接用于感染細胞或者純化濃縮后感染細胞,。

測序引物：

正向引物 EF-F：ATTCTCCTTGGAATTTGCCCT

反向引物 PGK-R：GGTGGATGTGGAATGTGTGCGA

原核培養(yǎng)特性

     pLV-mKate2-luci(EF1a)載體為高拷貝質(zhì)粒，帶有氨芐抗性基因,，可以在含有 100 μg/ml 氨芐抗生素的 LB培養(yǎng)基中增殖,。宿主菌可以采用 DH5 α，JM109,，TOP10 等常見大腸桿菌菌種,。