操作程序：

由您提供該實驗中目的基因的相關(guān)資料（如：基因名稱,、序列等信息）,，我們共同探討服務(wù)的可能性和技術(shù)路線；

商定服務(wù)收費,、付款方式,、服務(wù)期限等，并簽定技術(shù)服務(wù)合同,。

有您提供實驗所需的足夠量的實驗樣本（100mg組織或107個細(xì)胞）,，本公司不接受您提供的RNA樣本

PCR所需引物/探針（如果用探針法），可以由您自己提供,，也可以委托本公司設(shè)計合成（費用另計）,。如果由您自己提供，必須是PAGE純化的高質(zhì)量的干粉,，本公司不接受已溶解的引物/探針,。

我們進(jìn)行RNA抽提,、RNA定量、反轉(zhuǎn)錄,、Real-time PCR擴(kuò)增,、數(shù)據(jù)分析。

提供實驗報告,，包括實驗過程、所用儀器試劑,、擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)分析數(shù)據(jù)等,。

自備物品：

15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器

比色皿：用于比色的容器

96孔酶標(biāo)板：用于比色的容器

分光光度儀：用于比色分析

酶標(biāo)儀：用于微量樣品比色分析

儲存條件：

14℃或－20℃

準(zhǔn)備物品

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                   微升

稀釋液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                   毫升

產(chǎn)品說明書                                   1份

定量PCR方法：

a,、競爭法

選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板,。在同一反應(yīng)管中,，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴(kuò)增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,，分別測定熒光強(qiáng)度,，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù),。

b,、內(nèi)參照法

在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記,。在模板擴(kuò)增的同時,，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,，分別測定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板,。

c,、PCR－ELISA法

利用di高辛或等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,，再加入抗di高辛或酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物,，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗,，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，也可實現(xiàn)定量檢測目的。

使用方法：

一,、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進(jìn)行,。

2、血液樣品：用抽取受檢者靜脈血2mL,，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,，立即混勻。

3,、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢,。

4,、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢,。

二,、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照,。

2. 標(biāo)記 6 個離心管,，分別為 7,，6，5,，4，3,，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭,，下同）。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,，充分震蕩 1 分鐘,，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用。

5. 換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用

6. 換槍頭,，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用,。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用,。
服務(wù)流程：

接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù),。

N-丁基二乙 99%反式 GR,99.0%(劇品)豬血漿激肽釋放(KLKB1)免疫試劑盒

雙酚A三雙甲基烯酯 試劑級正丁  >99.5%(GC)豬血紅蛋白(Hb)免疫試劑盒

1-芐基哌 97%正丁  ACS, ≥99.4%豬血管性血友病因子/瑞斯托霉輔因子(VWF)免疫試劑盒

3-溴 分析標(biāo)準(zhǔn)品,，用于環(huán)境分析乙丁酯 for HPLC, ≥99.7% (GC)豬血管舒緩激肽(BK)免疫試劑盒

苯甲 無水級, 99.8%乙乙酯 AR,99%豬血管生成2(ANG-2)免疫試劑盒

乙基叔丁基 分析標(biāo)準(zhǔn)品乙乙酯  for HPLC, >99.0%(GC)豬血管生成1(ANG-1)免疫試劑盒

4-叔丁基吡啶 98%甲溶液 AR,含10-15% 甲穩(wěn)定劑豬血管內(nèi)皮粘附分子1(VCAM-1)免疫試劑盒

鄰苯二甲丁芐酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品甲 Standard for GC，>99.9%豬血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)免疫試劑盒

苯甲 Standard for GC,，≥99.5%（GC)甲 AR，99.5%豬血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)免疫試劑盒

聚氧乙烯月桂 高純級,，Brij-35甲 CP,，99.5%豬血管緊張轉(zhuǎn)化2(ACE2)免疫試劑盒

2-溴乙 分析標(biāo)準(zhǔn)品甲 AR,無水級豬血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)免疫試劑盒

2-溴-5-吡啶 99%甲  for HPLC, ≥99.9%豬血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫試劑盒

溴代硝烷 90%甲 農(nóng)殘級, ≥99.9%豬血管活性腸肽(VIP)免疫試劑盒

雙(4-)磷酯 99%甲  ≥99.9%(GC)豬旋毛蟲IgG抗體免疫試劑盒

2-環(huán)己基溴乙烷 98%甲 ACS豬β4（Thymosin β4）免疫試劑盒
**色葡萄球菌核酸檢測試劑盒48T小鼠白介27（IL-27）ELISA試劑盒,吲哚-3-乙磷化腺單磷活化蛋白激β1抗體

兔子皮質(zhì)*（Cortisol）ELISA試劑盒,吲哚-2-羧磷化間變型淋巴瘤激抗體

促卵泡（FSH）ELISA試劑盒--動物，人吲哚-2-羧磷化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體

小鼠催產(chǎn)（OT）ELISA試劑盒,1,3-苯二磷化三磷腺檸檬裂解抗體

小鼠抑瘤M（OSM）ELISA試劑盒,1,3-苯二磷化ATR抗體

小鼠中性粒彈性蛋白（NE）ELISA試劑盒,1,3-苯二核重定位及紡錘體檢查點蛋白AMN1抗體

小鼠抗凝血受體（ATR）ELISA試劑盒,Fmoc-O-磷基-L-酪氨天門冬酰連接糖基化11抗體

內(nèi)肽-2（EM-2）ELISA試劑盒--動物,，人2-甲氧基-4-(2-氨基乙基)衰老相關(guān)蛋白ASF1A抗體