酶聯(lián)免疫斑點法通常用于評估抗原特異的T細(xì)胞的功效,，即檢測IFN-γ的釋放,。酶聯(lián)免疫斑點法是一種非常靈敏的免疫檢測方法，它可以在單細(xì)胞水平檢測細(xì)胞因子的分泌,。酶聯(lián)免疫斑點法是靈敏的細(xì)胞檢測方法之一,，它檢測的靈敏度可以達(dá)到1：100 000個細(xì)胞。依賴于化學(xué)物質(zhì)的分析,，酶聯(lián)免疫斑點分析可以比傳統(tǒng)的ELISA靈敏20到200倍。

（1）Mouse IFN-γ ELISpotkit（ALP）（Mabtech 3321-2A）

（2）Human IFN-γ ELISpotkit（ALP）（Mabtech 3420-2A）

注釋：以上的ELISpotKits可用性已經(jīng)經(jīng)過作者測試,，用戶也可以用按自己的需要換別的替代。

（1）SIGMAFASTTM BCIP/NBT（Sigma B5655）

（3）倒掉培養(yǎng)基，并加入含有誘導(dǎo)物的細(xì)胞懸浮液,。

一般要做如下幾組：不含誘導(dǎo)物的細(xì)胞,、混有抗原（蛋白或多肽）的細(xì)胞和含PMA（10 ng/ml）和鈣離子載體Ionomycin（500 ng/ml）的細(xì)胞（陽性對照）。每個孔中的細(xì)胞數(shù)目決定于你的樣品中IFN釋放細(xì)胞的比例,，通常是從2×104到2.5×105,。如果靶細(xì)胞是多肽脈沖T2（T2pulsedwithpeptide）或瘤細(xì)胞，那么T細(xì)胞/靶細(xì)胞的比例需要滿足達(dá)到佳的檢測效果,。

（8）把板放在黑暗中反應(yīng),，直到有清楚的斑點顯示出來,。