WSU-HN30人口腔鱗狀細胞  

細胞培養(yǎng)說明書

一,、細胞培養(yǎng)條件

二,、細胞收到后處理

細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸的辦法,。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝,，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內,，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時,。鏡下觀察：未超過80%匯合度時,，可將瓶裝的*培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml*培養(yǎng)基,，放入37℃,、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時,，根據情況傳代或者凍存,，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松,，傳代后建議一瓶用原瓶里面的*培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的*培養(yǎng)基）

三,、細胞培養(yǎng)步驟

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中）,，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

1、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞,，*脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。

PS：若客戶收到2ml小管細胞,，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內,，嚴格無菌操作,；將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%,，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存,。若密度超過80%,，可直接進行傳代（方法同上）。