Thyrotropin-Releasing Hormone ELISA KIT即促甲狀腺激素釋放激素酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒,用于定量檢測血清,、血漿,、組織勻漿、細胞裂解液及其他生物體液中的促甲狀腺激素釋放激素(TRH),。TRH 由下丘腦神經元產生,,作為一種促垂體激素,能刺激垂體前葉釋放促甲狀腺激素(TSH)和催乳素,。此外,,在中樞和外周神經系統(tǒng)中,TRH 還發(fā)揮著神經遞質,、神經調節(jié)劑以及神經保護劑的作用,,曾被用于治療人類脊髓小腦變性和意識障礙。
該試劑盒多基于競爭酶聯(lián)免疫吸附技術,。以 96 孔板為例,,抗原預先包被在其表面。實驗時,,往孔中加入標準品,、測試樣品和生wu素結合試劑并孵育。包被的 TRH 與樣品中的 TRH,,會競爭和生wu素標記的抗體結合,。之后加入 HRP(辣根過氧化物酶)結合試劑繼續(xù)孵育,每步反應后都用洗滌緩沖液洗去未結合的結合物,。利用 TMB 底物來量化 HRP 酶促反應,,加入 TMB 底物后,只有含有足量 TRH 的孔會產生藍色產物,,添加酸性終止液后變?yōu)辄S色,。顏色深淺與板上結合的 TRH 量成反比,通過酶標儀在 450nm 波長處測量吸光度(OD 值),就能計算出 TRH 的濃度,。
不同品牌的試劑盒在具體參數(shù)上有所差異,。如 Abbexa 的 Human Thyrotropin Releasing Hormone (TRH) ELISA Kit,測試范圍為 7.81 pg/ml - 500 pg/ml,,靈敏度達 4.69 pg/ml ,,有效期 6 個月,可檢測人樣本,。Novus Biologicals 針對豬樣本的 Porcine Thyrotropin Releasing Hormone ELISA Kit ,,檢測范圍為 12.35 - 1000 pg/ml,,靈敏度為 4.93 pg/ml ,,檢測時長 2 小時。
使用試劑盒時,,一般需先將試劑盒組件和樣品平衡至室溫(18 - 25°C) ,。操作流程大致為:設置標準品、測試樣品和對照孔,;向標準品孔中加入 50 μl 稀釋后的標準品,,對照(零)孔加入 50 μl 標準品稀釋緩沖液,樣品孔加入 50 μl 稀釋后的樣品,;隨后向各孔立即加入 50 μl 檢測試劑 A,,37°C 孵育 1 小時;洗滌 3 次,;加入 100 μl 檢測試劑 B,,37°C 孵育 30 分鐘;再次洗滌 5 次,;加入 90 μl TMB 底物,,37°C 孵育 10 - 20 分鐘;最后加入 50 μl 終止液,,測量 450nm 處的 OD 值,。為保證結果準確,建議每次測試都繪制標準曲線,。
Thyrotropin-Releasing Hormone ELISA KIT為研究甲狀腺功能調節(jié)機制,、相關疾病診斷及藥物研發(fā)等提供了重要檢測手段,助力科研人員深入探索相關生理病理過程,。