Thyrotropin-Releasing Hormone ELISA KIT即促甲狀腺激素釋放激素酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒,,用于定量檢測(cè)血清,、血漿、組織勻漿,、細(xì)胞裂解液及其他生物體液中的促甲狀腺激素釋放激素(TRH),。TRH 由下丘腦神經(jīng)元產(chǎn)生,,作為一種促垂體激素,能刺激垂體前葉釋放促甲狀腺激素(TSH)和催乳素,。此外,,在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中,TRH 還發(fā)揮著神經(jīng)遞質(zhì),、神經(jīng)調(diào)節(jié)劑以及神經(jīng)保護(hù)劑的作用,,曾被用于治療人類脊髓小腦變性和意識(shí)障礙。
該試劑盒多基于競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附技術(shù),。以 96 孔板為例,,抗原預(yù)先包被在其表面。實(shí)驗(yàn)時(shí),,往孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品,、測(cè)試樣品和生wu素結(jié)合試劑并孵育。包被的 TRH 與樣品中的 TRH,,會(huì)競(jìng)爭(zhēng)和生wu素標(biāo)記的抗體結(jié)合,。之后加入 HRP(辣根過(guò)氧化物酶)結(jié)合試劑繼續(xù)孵育,每步反應(yīng)后都用洗滌緩沖液洗去未結(jié)合的結(jié)合物,。利用 TMB 底物來(lái)量化 HRP 酶促反應(yīng),,加入 TMB 底物后,只有含有足量 TRH 的孔會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物,,添加酸性終止液后變?yōu)辄S色,。顏色深淺與板上結(jié)合的 TRH 量成反比,通過(guò)酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度(OD 值),,就能計(jì)算出 TRH 的濃度,。
不同品牌的試劑盒在具體參數(shù)上有所差異。如 Abbexa 的 Human Thyrotropin Releasing Hormone (TRH) ELISA Kit,,測(cè)試范圍為 7.81 pg/ml - 500 pg/ml,,靈敏度達(dá) 4.69 pg/ml ,有效期 6 個(gè)月,,可檢測(cè)人樣本,。Novus Biologicals 針對(duì)豬樣本的 Porcine Thyrotropin Releasing Hormone ELISA Kit ,檢測(cè)范圍為 12.35 - 1000 pg/ml,,靈敏度為 4.93 pg/ml ,,檢測(cè)時(shí)長(zhǎng) 2 小時(shí)。
使用試劑盒時(shí),,一般需先將試劑盒組件和樣品平衡至室溫(18 - 25°C) ,。操作流程大致為:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品、測(cè)試樣品和對(duì)照孔,;向標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入 50 μl 稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品,,對(duì)照(零)孔加入 50 μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液,,樣品孔加入 50 μl 稀釋后的樣品;隨后向各孔立即加入 50 μl 檢測(cè)試劑 A,,37°C 孵育 1 小時(shí),;洗滌 3 次;加入 100 μl 檢測(cè)試劑 B,,37°C 孵育 30 分鐘,;再次洗滌 5 次;加入 90 μl TMB 底物,,37°C 孵育 10 - 20 分鐘,;最后加入 50 μl 終止液,測(cè)量 450nm 處的 OD 值,。為保證結(jié)果準(zhǔn)確,,建議每次測(cè)試都繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
Thyrotropin-Releasing Hormone ELISA KIT為研究甲狀腺功能調(diào)節(jié)機(jī)制,、相關(guān)疾病診斷及藥物研發(fā)等提供了重要檢測(cè)手段,,助力科研人員深入探索相關(guān)生理病理過(guò)程。