病理組織包埋
- 公司名稱(chēng) 毓秀生物科技(上海)有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地 上海
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2024/9/26 13:11:09
- 訪問(wèn)次數(shù) 4648
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病理組織包埋染色俗稱(chēng)HE 染色法為蘇木精-伊紅染色法,是石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一,,也是組織學(xué),、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中基礎(chǔ),、廣泛的技術(shù)方法,。
屬性為堿性的蘇木素染色液可以使細(xì)胞著藍(lán)色,為酸性的伊紅使細(xì)胞著紅色,其結(jié)果胞核呈藍(lán)色,,胞漿呈紅色,。兩種不同的染色液使細(xì)胞通過(guò)顏色來(lái)改變折光率,在光鏡下呈現(xiàn)出細(xì)胞圖像,。
病理組織包埋染色之所以成為細(xì)胞染色常用的方法是因?yàn)镠E染色法過(guò)程中除化學(xué)反應(yīng)外,,還有物理作用中吸附、吸收效果,,使HE染色提供良好的核漿對(duì)比染色效果,。
若細(xì)胞用4%多聚甲醛固定,,則染色時(shí)間相應(yīng)延長(zhǎng),蘇木素染色12-15min,,伊紅5min即可,。
6、培養(yǎng)瓶,、培養(yǎng)皿、鑷子,、蓋玻片,、載玻片、顯微鏡,。
病理組織包埋染色常見(jiàn)規(guī)格為310ml和3100lm。
2、蘇木精溶液染色:
(5)蒸餾水過(guò)洗 5 s
(2) 蒸餾水稍洗 30 s
(8)中性樹(shù)膠封固
著色深淺與組織或細(xì)胞的種類(lèi)有關(guān),也隨其生活周期及病理變化而改變,。例如,,細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對(duì)伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染,。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時(shí),,伊紅著色由淺變深。
病理組織包埋染色全組織包埋免疫熒光染色
另取5只小鼠經(jīng)水合氯醛麻醉后,,建立跨區(qū)耳瓣模型,方法同前,。在建模后第3天處死小鼠,,脫毛液盡量去除小鼠耳部毛發(fā),將耳瓣側(cè)耳部剪下,,利用生理鹽水洗凈,,在光學(xué)放大體式顯微鏡下使用剪刀和鑷子進(jìn)一步去除毛發(fā)。接著按照以下步驟進(jìn)行組織處理:(1)將剪下的小鼠耳放入裝有甲醇的EP管中,,沉至管底,,-20 ℃保存至少30 min;(2)取出鼠耳,,放入裝有Hanks平衡鹽液的培養(yǎng)皿中,,在體式顯微鏡下利用鑷子緩慢分離,將耳組織分為前層皮膚,、軟骨及后層皮膚,,將分離出的前層皮膚放入裝有4%的多聚甲醛的EP管中,4 ℃固定1 h直至組織沉淀至管底,;(3)取出前層皮膚,,放入1×PBS中洗滌3次,每次5 min,;(4)取出洗滌后的前層皮膚,,置于裝有1×PBS緩沖液的培養(yǎng)皿中,在光學(xué)放大體式顯微鏡下使用剪刀和鑷子剔除多余的脂肪結(jié)締組織,,進(jìn)行精修,。
對(duì)建立跨區(qū)耳瓣模型第3 d的鼠耳進(jìn)行全組織包埋免疫熒光染色,觀察跨區(qū)耳瓣模型建立3 d后,,跨區(qū)耳瓣choke區(qū)域小血管及毛細(xì)血管的管徑大小,,末梢神經(jīng)走行以及與血管再生相關(guān)的單核巨噬細(xì)胞[4]分布情況,。CD31與α-SMA抗體分別對(duì)血管內(nèi)皮與血管平滑肌進(jìn)行染色,,利用Tuj1及α-SMA對(duì)軸突與血管分別進(jìn)行標(biāo)志,利用CD68抗體進(jìn)行單核巨噬細(xì)胞染色,。具體操作步驟如下:(1)制備封閉液(簡(jiǎn)稱(chēng)10%HIGS),,將10 ml山羊血清、0.2 ml曲拉通X-100溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中,并應(yīng)用0.45 μm的濾器對(duì)配成的溶液進(jìn)行濾過(guò),。(2)在室溫條件下,,將處理完的鼠耳前層皮膚放入裝有1 ml 10% HISG的24孔板中,搖床輔助孵育30 min,。(3)制備一抗溶液,,使用10%HIGS稀釋一抗,,稀釋比例1∶500。將CD31,、CD68,、α-SMA、Tuj1一抗同時(shí)稀釋混合使用,,孵育時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)可加入0.2%抑菌防腐,。(4)將經(jīng)孵育的皮膚取出放入新孔或用滴管吸除10%HIGS溶液后,加入150 μm一抗溶液,,4 ℃搖床孵育過(guò)夜,,第2天將皮膚轉(zhuǎn)移至新孔洞或用滴管吸除原有溶液,加入1 ml 2%HIGS溶液,,室溫下?lián)u床洗脫一抗3次,,每次15 min,每次洗脫更換液體,。(5)制備二抗溶液,,使用10%HIGS稀釋二抗,稀釋比例1∶500,,將CD31,、CD68、α-SMA,、Tuj1二抗同時(shí)稀釋混合使用,,通過(guò)0.22 μm的生物濾膜對(duì)配成的液體進(jìn)行過(guò)濾。13 000 g離心二抗溶液,,離心5 min,。(6)將洗脫后的皮膚取出,放入新孔洞或用滴管吸除原有溶液,,加入150 μm二抗溶液,,室溫下?lián)u床孵育1 h,避光,。(7)取出皮膚,,將皮膚轉(zhuǎn)移至新孔洞,加入1 ml 2%HIGS溶液,。室溫下,,搖床洗脫二抗3次,每次15 min,,每次洗脫更換液體,。(8)取出皮膚,轉(zhuǎn)移至新孔洞,,加入150 μm DAPI (1∶1000) 溶液染色,,孵育10 min,。(9)取出皮膚,轉(zhuǎn)移至新孔洞,,加入1 ml 2%HIGS溶液,。室溫下,搖床洗脫3次,,每次15 min,,每次洗脫更換液體。(10)把組織樣本放入載玻片上鋪平,,滴加1滴熒光封片劑,,封蓋蓋玻片,放于室溫過(guò)夜,待熒光封片劑凝固,,于共聚焦激光顯微鏡下掃描觀察,。
此產(chǎn)品只用于科研,不作用于人體
毓秀生物科技(上海)有限公司是一家專(zhuān)注于生物科技前沿技術(shù)研發(fā)和科研技術(shù)服務(wù)的公司,,公司建有專(zhuān)業(yè)的分子生物學(xué),、細(xì)胞生物學(xué)、組織病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室,,為眾多生物醫(yī)藥企業(yè),、科研機(jī)構(gòu)、醫(yī)院及高校提供分子生物學(xué),、細(xì)胞生物學(xué),、病理形態(tài)學(xué)等方面科研服務(wù)。公司核心團(tuán)隊(duì)曾在國(guó)內(nèi)外許多優(yōu)秀學(xué)府從事過(guò)多年研發(fā)工作,,秉承“為客戶創(chuàng)造價(jià)值,,為員工實(shí)現(xiàn)夢(mèng)想,為社會(huì)創(chuàng)造財(cái)富”的經(jīng)營(yíng)理念,,堅(jiān)持以技術(shù)創(chuàng)新為先導(dǎo),,以服務(wù)質(zhì)量為根本,為中國(guó)生物醫(yī)藥和科學(xué)研究提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),。