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病理組織包埋

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 公司名稱(chēng) 毓秀生物科技(上海)有限公司
  • 品牌 其他品牌
  • 型號(hào)
  • 產(chǎn)地 上海
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間 2024/9/26 13:11:09
  • 訪問(wèn)次數(shù) 4648

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毓秀生物科技(上海)有限公司坐落于全國(guó)的科技,、貿(mào)易、信息,、金融和航運(yùn)中心——上海,。主要經(jīng)營(yíng)范圍為生物技術(shù)的研究及推廣等。為客戶提供醫(yī)藥研發(fā)合同服務(wù)外包(CRO),。分子生物學(xué),、細(xì)胞生物學(xué)、病理形態(tài)學(xué)等科研服務(wù)(免疫組化、HE染色 ,,病毒包裝,,課題服務(wù))。研發(fā)及生產(chǎn)科研及臨床診斷產(chǎn)品,?;蚓庉嫯a(chǎn)品(crisp-cas9),病理診斷耗材,,臨床抗原研發(fā)及生產(chǎn),。

主要產(chǎn)品有免疫組化,病理組織包埋染色,,病毒包裝,熒光定量Q-PCR檢測(cè),,人源化抗體,載體構(gòu)建,,熒光原位雜交技術(shù)fish檢測(cè),ELISA檢測(cè),免疫熒光,,CRISPR cas9 基因編輯等,。

我們的團(tuán)隊(duì)

管理團(tuán)隊(duì):管理團(tuán)隊(duì)具有多年生物科技行業(yè)從業(yè)經(jīng)歷,大多畢業(yè)于國(guó)內(nèi)著名高校,。

技術(shù)團(tuán)隊(duì):技術(shù)團(tuán)隊(duì)具有大學(xué)和科研單位多年研究和開(kāi)發(fā)經(jīng)驗(yàn),,承擔(dān)數(shù)個(gè)國(guó)家基金課題。

顧問(wèn)團(tuán)隊(duì):國(guó)外留學(xué)博士及著名大學(xué)教授,,*引進(jìn)人才,。

我們的宗旨

以客戶為中心,為客戶提供高效優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù),,為客戶創(chuàng)造價(jià)值,。







技術(shù)服務(wù),實(shí)驗(yàn)服務(wù),,病毒包裝,,免疫組化,抗體,,試劑,,耗材

供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè)

  病理組織包埋染色俗稱(chēng)HE 染色法為蘇木精-伊紅染色法,是石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一,,也是組織學(xué),、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中基礎(chǔ),、廣泛的技術(shù)方法,。

 

  屬性為堿性的蘇木素染色液可以使細(xì)胞著藍(lán)色,為酸性的伊紅使細(xì)胞著紅色,其結(jié)果胞核呈藍(lán)色,,胞漿呈紅色,。兩種不同的染色液使細(xì)胞通過(guò)顏色來(lái)改變折光率,在光鏡下呈現(xiàn)出細(xì)胞圖像,。

 

  病理組織包埋染色之所以成為細(xì)胞染色常用的方法是因?yàn)镠E染色法過(guò)程中除化學(xué)反應(yīng)外,,還有物理作用中吸附、吸收效果,,使HE染色提供良好的核漿對(duì)比染色效果,。

 

  病理組織包埋染色實(shí)驗(yàn)步驟
  1、樣品制備:對(duì)于貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞,,胰酶消化,,調(diào)整細(xì)胞濃度約1×105/ml,滴加于蓋玻片上(置于6孔板中),,培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后,,取出細(xì)胞爬片,用PBS洗滌3次,。
  2,、樣品固定:95%乙醇固定20min,PBS洗滌2次,,每次1min,。
  3、染核:蘇木素染液染色2-3min,,自來(lái)水洗滌,。
  4、分色:鏡下觀察,,若細(xì)胞核染色過(guò)深,,用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒,自來(lái)水洗滌,。
  5,、染胞質(zhì):浸入伊紅染液染色1min,自來(lái)水洗滌,。
  6,、吹干或自然晾干細(xì)胞爬片后,中性樹(shù)膠封片,。

  若細(xì)胞用4%多聚甲醛固定,,則染色時(shí)間相應(yīng)延長(zhǎng),蘇木素染色12-15min,,伊紅5min即可,。

 

  病理組織包埋染色實(shí)驗(yàn)相關(guān)用品
  1、固定液:常用95%乙醇和冰丙酮
  2、蘇木精染液:稱(chēng)取蘇木精粉0.5g,,銨礬24g溶解于70ml蒸餾水中,,然后取NaIO 31g,水5ml,,再加入甘油30ml和冰醋酸2ml,,混合均勻,濾紙過(guò)濾,,備用,。
  3、伊紅染液:稱(chēng)取0.5g   伊紅染液,,溶于100ml蒸餾水中,。
  4、稀鹽酸乙醇溶液:用75%乙醇配制1%鹽酸,。
  5,、系列濃度的乙醇、二甲苯,、中性樹(shù)膠,。

  6、培養(yǎng)瓶,、培養(yǎng)皿、鑷子,、蓋玻片,、載玻片、顯微鏡,。

 

  病理組織包埋染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
  細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,,軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,,粘液呈灰藍(lán)色,。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色,。膠原纖維呈淡粉紅色,,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,,蛋白性液體呈粉紅色,。著況與組織或細(xì)胞的種類(lèi)有關(guān),也隨其生活周期及病理變化而改變,。例如,,細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對(duì)伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時(shí),,伊紅著色由淺變深,。

  病理組織包埋染色常見(jiàn)規(guī)格為310ml和3100lm。

 

  一,、常規(guī)病理組織包埋染色/HE染色步驟
  1,、石蠟切片脫蠟復(fù)水:
  (1)二甲苯(Ⅰ) 15min
  (2) 二甲苯(Ⅱ) 15 min
  (3)二甲苯:無(wú)水乙醇=1:1 2min
  (4) 100%乙醇(Ⅰ) 5min
  (5) 100%乙醇(Ⅱ) 5 min
  (6) 80%乙醇 5min
  (7) 蒸餾水 5 min

 

     2、蘇木精溶液染色:

  (1) 蘇木精溶液染色 5 min
  (2) 水洗10 min 或流水沖洗5 min返藍(lán)
  (3) 1%鹽酸乙醇 30s分化
  (4) 水洗 30 s

  (5)蒸餾水過(guò)洗 5 s 

 

  3,、伊紅液染色
  (1) 0.5%伊紅液染色 1-3 min

  (2) 蒸餾水稍洗 30 s

 

  4,、病理組織包埋染色脫水封片
  (1) 80%乙醇稍洗 30 s
  (2) 95%乙醇(Ⅰ)1 min
  (3) 95%乙醇(Ⅱ) 1 min
  (4) 無(wú)水乙醇 (Ⅰ)3 min
  (5)無(wú)水乙醇(Ⅱ)3 min
  (6)二甲苯(Ⅰ) 3 min
  (7)二甲苯(Ⅱ) 3 min

  (8)中性樹(shù)膠封固

 

  二、病理組織包埋染色/HE染色結(jié)果的判斷
  1,、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
  細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,,軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,,粘液呈灰藍(lán)色,。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色,。膠原纖維呈淡粉紅色,,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,,蛋白性液體呈粉紅色,。

  著色深淺與組織或細(xì)胞的種類(lèi)有關(guān),也隨其生活周期及病理變化而改變,。例如,,細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對(duì)伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染,。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時(shí),,伊紅著色由淺變深。

 

  2,、病理組織包埋染色/HE染色評(píng)定標(biāo)準(zhǔn):
 ?。?)切片完整,厚度4-6微米,,厚薄均勻,,無(wú)皺褶無(wú)刀痕;
 ?。?)染色核漿分明,,紅藍(lán)適度,透明潔凈,,封裱美觀,。

  

病理組織包埋染色全組織包埋免疫熒光染色

  (一)取材及組織處理

  另取5只小鼠經(jīng)水合氯醛麻醉后,,建立跨區(qū)耳瓣模型,方法同前,。在建模后第3天處死小鼠,,脫毛液盡量去除小鼠耳部毛發(fā),將耳瓣側(cè)耳部剪下,,利用生理鹽水洗凈,,在光學(xué)放大體式顯微鏡下使用剪刀和鑷子進(jìn)一步去除毛發(fā)。接著按照以下步驟進(jìn)行組織處理:(1)將剪下的小鼠耳放入裝有甲醇的EP管中,,沉至管底,,-20 ℃保存至少30 min;(2)取出鼠耳,,放入裝有Hanks平衡鹽液的培養(yǎng)皿中,,在體式顯微鏡下利用鑷子緩慢分離,將耳組織分為前層皮膚,、軟骨及后層皮膚,,將分離出的前層皮膚放入裝有4%的多聚甲醛的EP管中,4 ℃固定1 h直至組織沉淀至管底,;(3)取出前層皮膚,,放入1×PBS中洗滌3次,每次5 min,;(4)取出洗滌后的前層皮膚,,置于裝有1×PBS緩沖液的培養(yǎng)皿中,在光學(xué)放大體式顯微鏡下使用剪刀和鑷子剔除多余的脂肪結(jié)締組織,,進(jìn)行精修,。

 

  (二)全組織包埋免疫熒光染色

  對(duì)建立跨區(qū)耳瓣模型第3 d的鼠耳進(jìn)行全組織包埋免疫熒光染色,觀察跨區(qū)耳瓣模型建立3 d后,,跨區(qū)耳瓣choke區(qū)域小血管及毛細(xì)血管的管徑大小,,末梢神經(jīng)走行以及與血管再生相關(guān)的單核巨噬細(xì)胞[4]分布情況,。CD31與α-SMA抗體分別對(duì)血管內(nèi)皮與血管平滑肌進(jìn)行染色,,利用Tuj1及α-SMA對(duì)軸突與血管分別進(jìn)行標(biāo)志,利用CD68抗體進(jìn)行單核巨噬細(xì)胞染色,。具體操作步驟如下:(1)制備封閉液(簡(jiǎn)稱(chēng)10%HIGS),,將10 ml山羊血清、0.2 ml曲拉通X-100溶于100 ml磷酸鹽緩沖液中,并應(yīng)用0.45 μm的濾器對(duì)配成的溶液進(jìn)行濾過(guò),。(2)在室溫條件下,,將處理完的鼠耳前層皮膚放入裝有1 ml 10% HISG的24孔板中,搖床輔助孵育30 min,。(3)制備一抗溶液,,使用10%HIGS稀釋一抗,,稀釋比例1∶500。將CD31,、CD68,、α-SMA、Tuj1一抗同時(shí)稀釋混合使用,,孵育時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)可加入0.2%抑菌防腐,。(4)將經(jīng)孵育的皮膚取出放入新孔或用滴管吸除10%HIGS溶液后,加入150 μm一抗溶液,,4 ℃搖床孵育過(guò)夜,,第2天將皮膚轉(zhuǎn)移至新孔洞或用滴管吸除原有溶液,加入1 ml 2%HIGS溶液,,室溫下?lián)u床洗脫一抗3次,,每次15 min,每次洗脫更換液體,。(5)制備二抗溶液,,使用10%HIGS稀釋二抗,稀釋比例1∶500,,將CD31,、CD68、α-SMA,、Tuj1二抗同時(shí)稀釋混合使用,,通過(guò)0.22 μm的生物濾膜對(duì)配成的液體進(jìn)行過(guò)濾。13 000 g離心二抗溶液,,離心5 min,。(6)將洗脫后的皮膚取出,放入新孔洞或用滴管吸除原有溶液,,加入150 μm二抗溶液,,室溫下?lián)u床孵育1 h,避光,。(7)取出皮膚,,將皮膚轉(zhuǎn)移至新孔洞,加入1 ml 2%HIGS溶液,。室溫下,,搖床洗脫二抗3次,每次15 min,,每次洗脫更換液體,。(8)取出皮膚,轉(zhuǎn)移至新孔洞,,加入150 μm DAPI (1∶1000) 溶液染色,,孵育10 min,。(9)取出皮膚,轉(zhuǎn)移至新孔洞,,加入1 ml 2%HIGS溶液,。室溫下,搖床洗脫3次,,每次15 min,,每次洗脫更換液體。(10)把組織樣本放入載玻片上鋪平,,滴加1滴熒光封片劑,,封蓋蓋玻片,放于室溫過(guò)夜,待熒光封片劑凝固,,于共聚焦激光顯微鏡下掃描觀察,。

 

此產(chǎn)品只用于科研,不作用于人體

 

毓秀生物科技(上海)有限公司是一家專(zhuān)注于生物科技前沿技術(shù)研發(fā)和科研技術(shù)服務(wù)的公司,,公司建有專(zhuān)業(yè)的分子生物學(xué),、細(xì)胞生物學(xué)、組織病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室,,為眾多生物醫(yī)藥企業(yè),、科研機(jī)構(gòu)、醫(yī)院及高校提供分子生物學(xué),、細(xì)胞生物學(xué),、病理形態(tài)學(xué)等方面科研服務(wù)。公司核心團(tuán)隊(duì)曾在國(guó)內(nèi)外許多優(yōu)秀學(xué)府從事過(guò)多年研發(fā)工作,,秉承“為客戶創(chuàng)造價(jià)值,,為員工實(shí)現(xiàn)夢(mèng)想,為社會(huì)創(chuàng)造財(cái)富”的經(jīng)營(yíng)理念,,堅(jiān)持以技術(shù)創(chuàng)新為先導(dǎo),,以服務(wù)質(zhì)量為根本,為中國(guó)生物醫(yī)藥和科學(xué)研究提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),。

 

 

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