網(wǎng)狀纖維染色銀染實(shí)驗(yàn)服務(wù)

實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡介:網(wǎng)狀纖維(reticular fiber)網(wǎng)狀纖維在疏松結(jié)締組織中含量較少,纖維較細(xì)，有分支,彼此交織成網(wǎng)狀,。用浸銀法可將纖維染成黑色,，故又稱嗜銀纖維(argyrophilic fiber)。電鏡觀察,，網(wǎng)狀纖維具有等間距的橫紋結(jié)構(gòu),，其化學(xué)成分也是膠原蛋白，和膠原纖維相似,。網(wǎng)狀纖維的嗜銀性是由于包在原纖維上的糖蛋白所致,。

實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理:氨銀液被組織吸咐與組織中的蛋白結(jié)合，經(jīng)甲醛還原成黑色的金屬銀沉積于組織內(nèi)及表面,。用氯化金調(diào)色后,，再用硫代硫酸鈉液洗去未還原的銀鹽,從而將組織內(nèi)的網(wǎng)狀纖維清晰地顯示出來。

實(shí)驗(yàn)操作流程:

1,、切片脫蠟至水,，蒸餾水洗,

2、用0.5%高 錳酸鉀氧化5min,

3,、自來水洗,，繼用蒸餾水洗,

4、用2%草酸漂白切片2min,

5,、自來水洗,，蒸餾水洗,

6、2%硫酸鐵鈹媒染5min,

7,、水洗,，蒸餾水洗,

8、滴入氨性銀溶液浸染3 -5min,

9,、蒸餾水洗數(shù)次,

10,、 10%甲醛液還原5-10min,

11、水洗2min,

12,、用核固紅染色10-15min,

13,、水洗10min, 各級酒精脫水,

14、 常規(guī)透明,，中性樹膠封固,。

結(jié)果:網(wǎng)狀纖維黑色，核紅色,膠原纖維黃棕色,。

實(shí)驗(yàn)注意事項:

客戶提供:

1,、組織樣品:新鮮組織放入液氮或80度保存，組織不少于100mg;

2,、培養(yǎng)細(xì)胞:通過細(xì)胞計數(shù)取不少于2x106個細(xì)胞于EP管,加入0 .5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑,，溝后保存于冰箱(-80°C, 避免反復(fù)凍融) ;

3,、血液細(xì)胞標(biāo)本:以抗凝管保存血樣或以淋巴細(xì)胞分離液分離細(xì)胞后加入05ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑,保存(-80°C可長期保存,避免反復(fù)凍融) ;

4、血清或細(xì)胞培養(yǎng)液標(biāo)本:離心去掉雜質(zhì)后取上清入EP管,保存(49C可保存15-20天, -80°C可長期保存,，避免反復(fù)凍融) ;

5,、石蠟切片，冰凍切片以及細(xì)胞爬片,，涂片等,。

6、樣本運(yùn)輸:可選擇以下任何一種方式寄送標(biāo)本

組織樣本,、細(xì)胞樣本以干冰運(yùn)輸或加入蛋白保護(hù)劑后，加冰袋寄送;

細(xì)胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染,、培養(yǎng)液不漏出) ;

血清或上清液直接加冰袋寄送(視快遞時效一般控制在2-3天內(nèi)),，

交付標(biāo)準(zhǔn):

1、圖片;

2,、完整項目報告(材料,、試劑、儀器,、方法,、數(shù)據(jù)分析、實(shí)驗(yàn)結(jié)果),。

其他:

1,、所使用的玻璃儀器，須用清潔液處理,。

2,、配制氨銀溶液時，氨水加入的量不能過多或不足,，過多感應(yīng)下降,，會使液體過堿，滴染時,，切片容易脫落,，過少則感應(yīng)上升，浸染效果不佳,，不好掌握,。

3、配制氨銀液時,，有可能用玻璃蒸餾水,。

4、使用的化學(xué)試劑應(yīng)盡量用分析純以上,。

5,、切片氧化漂白應(yīng)*,，不能使殘存的福爾馬林留于片上，否則將導(dǎo)致過早還原而使浸染不均勻,。

6,、如果有某種原因而導(dǎo)致切片脫落時，應(yīng)使用涂膠的載片,，以增加附貼性,。

7、如有可能,，氨銀溶液以新配為佳,，但也可保存于4°C冰箱中達(dá)一 個月左右,這種液體易揮發(fā)，用后即須蓋緊,，當(dāng)沉淀物出現(xiàn)時,，該溶液應(yīng)拋棄。

8,、應(yīng)秀氯化金調(diào)色時,，可將膠原纖維著染的黃棕色去除掉。

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