凝膠色譜柱廠家 在單克隆抗體藥物的初期研發(fā)階段中,，通過對細胞株實施篩選,，選出能產(chǎn)生滴度較高,、ADCC活性較高的細胞株,。此時常會用到的幾種評估方法是，通過生物檢定法測定ADCC活性,；通過表面等離子共振法（SPR）測定人體IgG受體（FcγⅢa等）的親和力,；通過LC/MS分析抗體酶切下來的糖鏈結(jié)構(gòu)等。但這些方法都需要花費大量的時間和人力,。

能夠把這些復雜的評估分析法由繁化簡,，并快速完成分析的HPLC色譜柱就是TSKgel FcR-IIIA-NPR,。

使用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以直接分離抗體，無需對細胞培養(yǎng)液進行前處理,?？贵w主要可以分離出3個洗脫峰。已有研究表明,，抗體糖鏈末端的半乳糖數(shù)量越多,，在此色譜柱中的保留能力越強，而保留能力越強的洗脫峰,，其ADCC活性就越高,。

細胞培養(yǎng)液中單克隆抗體的分離

TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以用來測定和監(jiān)控細胞培養(yǎng)時抗體糖鏈的性狀變化。取不同培養(yǎng)天數(shù)的細胞培養(yǎng)液,，使用Protein A填料對抗體樣品粗純后,，再采用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱分析的結(jié)果如下圖所示。

凝膠色譜柱廠家 抗體細胞培養(yǎng)天數(shù)和產(chǎn)生抗體的變化

隨著培養(yǎng)天數(shù)的延長,，抗體的3個洗脫峰會向前側(cè)的洗脫峰位移,。雖然延長了細胞培養(yǎng)天數(shù)，抗體的產(chǎn)量增加,，但是由于受到細胞外糖鏈修飾酶的影響,，在色譜柱中的保留能力較高的抗體（多糖的末端半乳糖數(shù)量較多的抗體）的洗脫峰反而減少了。因此,，可以推定產(chǎn)生的抗體的ADCC活性已經(jīng)降低,。

TSKgel FcR-IIIA-NPR的主要分析用途

①確認不同細胞株(CHO細胞、HEK細胞等)中抗體的性狀變化,。

②確認多個細胞株篩選時抗體的性狀變化,。

③確認當改變細胞培養(yǎng)基添加劑時抗體的性狀變化

④細胞培養(yǎng)過程中隨培養(yǎng)天數(shù)的變化導致抗體性狀變化的確認。

⑤細胞培養(yǎng)規(guī)模放大(更改培養(yǎng)方法)時,，確認抗體是否發(fā)生性狀變化,。