液相色譜柱的系統(tǒng)結構分析和維護方法
液相色譜柱進樣系統(tǒng):一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作,,進樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的,。
液相色譜柱輸液系統(tǒng):該系統(tǒng)包括高壓泵,、流動相貯存器和梯度儀三部分,。高壓泵的一般壓強為l.47~4.4X107Pa,流速可調且穩(wěn)定,,當高壓流動相通過層析柱時,,可降低樣品在柱中的擴散效應,,可加快其在柱中的移動速度,這對提高分辨率,、回收樣品,、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存錯和梯度儀,,可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變,,包括改變洗脫液的極性、離子強度,、PH值,,或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(即使僅有一個基團的差別或是同分異構體)都能獲得有效分離,。
液相色譜柱分離系統(tǒng):該系統(tǒng)包括色譜柱,、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為10~50cm,,內徑為2~5mm,,由"不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,住內裝有直徑為5~10靘粒度的固定相,。固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成,,它們都有惰性、多孔性和比表面積大的特點,,加之其表面經過機械涂漬,,或者用化學法偶聯(lián)各種基因或配體的有機化合物。因此,,這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性,。
液相色譜柱的維護
1、使用預柱保護分析柱,;
2,、盡量不超過該色譜柱的ph范圍;
3,、避免流動相組成及極性的劇烈變化,;
4、流動相使用前必須經脫氣和過濾處理,;
5、如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相,,應在實驗完畢柱子沖洗干凈,,并保存大乙腈中;
6,、壓力升高是需要更換預柱的信號,。
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