細胞克隆形成實驗技術服務介紹

細胞克隆形成率即細胞接種存活率，表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數(shù)量,。貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆,，而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞?？寺⌒纬陕史从臣毎后w依賴性和增殖能力兩個重要性狀,。

細胞克隆形成實驗技術服務基本步驟

A、取對數(shù)生長期的各組細胞,，分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細胞，并把細胞懸浮在10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中備用,。

B,、將細胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋，每組細胞分別以每皿50、100,、200個細胞的梯度密度分別接種含10mL 37℃預溫培養(yǎng)液的皿中,，并輕輕轉動，使細胞分散均勻,。置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3周,。

C、經(jīng)常觀察,，當培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時,，終止培養(yǎng)。棄去上清液,，用PBS小心浸洗2次,。加4%多聚甲醛固定細胞5mL固定15分鐘。然后去固定液,，加適量GIMSA應用染色液染10～30分鐘,，然后用流水緩慢洗去染色液，空氣干燥,。

D,、將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的透明膠片，用肉眼直接計數(shù)克隆,，或在顯微鏡（低倍鏡）計數(shù)大于10個細胞的克隆數(shù),。后計算克隆形成率?？寺⌒纬陕?=（克隆數(shù)/接種細胞數(shù)）×100%

平板克隆形成試驗方法簡單,，適用于貼壁生長的細胞。適宜底物為玻璃的,、塑料瓶皿,。試驗成功的關鍵是細胞懸液的制備和接種密度。細胞一定要分散得好,，不能有細胞團,，接種密度不能過大。

實驗結果展示

客戶需知

1）,、客戶需提供生長狀態(tài)良好的實驗細胞及細胞培養(yǎng)條件,； 

2）、客戶需準確告知實驗設計內容,，如樣本濃度等,，并提供實驗所需因子等。

實驗周期

15個工作日（具體實驗周期視實驗設計方案而異）

收費標準 

歡迎咨詢創(chuàng)凌生物,！