這些永生化的人肝細(xì)胞構(gòu)成了藥物毒理學(xué)研究的體外模型，并用于研究人肝細(xì)胞癌的病因和發(fā)病機(jī)理,。

注意：使用的燒瓶應(yīng)預(yù)先涂上 0.01 mg / mL纖連蛋白，0.03 mg / mL I型牛膠原蛋白和溶于BEBM培養(yǎng)基中的0.01 mg / mL牛血清白蛋白的混合物。 

1. 移除并丟棄培養(yǎng)基,。
2. 加入新鮮的0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液（2.0-3.0毫升,，用于T75燒瓶）覆蓋細(xì)胞，沖洗并除去大部分胰蛋白酶溶液,，留下薄涂層,。
3. 使培養(yǎng)物在室溫（或37℃）下靜置直至細(xì)胞脫離并在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞直至細(xì)胞層分散（通常在5至15分鐘內(nèi)）。

   注意：為了避免結(jié)塊,，在等待細(xì)胞分離時(shí),，不要通過(guò)敲擊或搖動(dòng)燒瓶來(lái)攪動(dòng)細(xì)胞。難以分離的細(xì)胞可置于37℃以促進(jìn)分散,。

4. 用0.1％大豆胰蛋白酶抑制劑中和胰蛋白酶并通過(guò)輕輕吹打吸出細(xì)胞,。通過(guò)溫和離心（150xg至400xg，8-12分鐘）除去解離劑,，并將細(xì)胞重懸于新鮮的*生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,。 
5. 將適當(dāng)?shù)确莸募?xì)胞懸浮液加入新培養(yǎng)容器中。
6. 在37°C孵育培養(yǎng)物,。 
7. 建議使用0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液（GIBCO目錄號(hào)25300-054）進(jìn)行解離,。用0.1％大豆胰蛋白酶抑制劑溶液（ATCC 30-2104）中和。

中等更新：每周兩到三次,。

注意：有關(guān)細(xì)胞系的酶解和傳代培養(yǎng)的更多信息,，請(qǐng)參閱動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中的第10章， R.Ian Freshney撰寫(xiě)的基本技術(shù)手冊(cè),，第3版,，由Alan R.Liss，NY,，1994出版,。

冷凍培養(yǎng)基：補(bǔ)充有5％（v / v）DMSO的*生長(zhǎng)培養(yǎng)基

儲(chǔ)存溫度：液氮?dú)庀?/p>

氣氛：空氣，95％; 二氧化碳（CO 2）,，5％

溫度： 37°C