穩(wěn)定細胞株構(gòu)建/鏡像綺點（iCell）

穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系（穩(wěn)定表達細胞株）指在細胞中持續(xù)穩(wěn)定表達特定基因或干擾特定基因表達,。穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細胞染色體上，使細胞長期穩(wěn)定表達該基因,。穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株包括多克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株和單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株,。慢病毒感染目的細胞后，通過抗性基因篩選得到的細胞株是多個細胞克隆的組合,。單克隆細胞株是從多克隆細胞中經(jīng)細胞克隆挑選得到的,，由一個細胞擴增得到的細胞株。單克隆細胞株性狀統(tǒng)一,，傳代過程中細胞的基因表達保持穩(wěn)定,。

用轉(zhuǎn)染質(zhì)粒或病毒侵染的方法將構(gòu)建好的含靶基因的載體導(dǎo)入細胞,，根據(jù)不同的基因載體中所含的抗性標志選用相應(yīng)的藥物進行篩選混合陽性克隆,。在陽性混合克隆的基礎(chǔ)上，得到單細胞長出的陽性單克隆,，繼而得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株,。常用的真核表達載體的抗性標志物有嘌呤霉素（puromycin）、潮霉素（hygromycin）和新mei素（neomycin）,。

篩選穩(wěn)定細胞株的兩種方法
      1,、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，單克隆方法篩選穩(wěn)定細胞系
      對大多數(shù)細胞轉(zhuǎn)染效率較低,。對于基因過表達,，如果轉(zhuǎn)染效率達到40%，基因過表達尚可,。但是對于基因干擾實驗,，對轉(zhuǎn)染效率要求遠遠高于基因過表達,，通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無法滿足。
      另外,，質(zhì)粒游離于細胞質(zhì)中,，很快降解，無法滿足較長時間的檢測項目,；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低,，穩(wěn)定細胞株構(gòu)建耗時耗力，且得率很低,，往往需要挑取單克隆株,。
      2、病毒感染篩選穩(wěn)定細胞株
      病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效,，是目前主流的穩(wěn)定細胞系篩選方法,。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，由于其高效整合,、高效轉(zhuǎn)錄,、高效表達、宿主范圍廣,，感染效率高,，且與細胞染色體整合而不發(fā)生基因重排，是制備穩(wěn)定細胞株的理想載體,。
穩(wěn)定細胞株構(gòu)建/鏡像綺點（iCell）

服務(wù)流程

1、載體構(gòu)建：將外源基因構(gòu)建到合適的載體上,，如需病毒轉(zhuǎn)染,，則包裝病毒。
     2,、篩選濃度測定：以 10-14 天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度,。
     3、細胞接種：轉(zhuǎn)染實驗前天接種細胞,，各種細胞的平板密度依據(jù)各種細胞的生長率和細胞形狀而定,。進行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細胞應(yīng)達到 60%-80% 覆蓋。
     4,、細胞轉(zhuǎn)染：用構(gòu)建好的載體（或包裝好的病毒）轉(zhuǎn)染目的細胞,。
     5、抗生素篩選,。
     6,、鑒定篩選結(jié)果。
    終交付
    1,、病毒滴度檢測報告,；穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株,；
    2、結(jié)題報告,，包括詳細的實驗流程,，測序結(jié)果和峰圖、引物序列,、載體圖譜和滴度測定報告和q-P

鏡像綺點（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)：

一,、原代細胞服務(wù)
      各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源；
      多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源,；
      原代細胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑,、kit、培養(yǎng)基添加劑等,；
      原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實驗外包服務(wù),；

二、細胞株/系服務(wù)
      細胞株/系培養(yǎng),、增殖,、凍存和相關(guān)說明書；
      細胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo),；
      細胞系培養(yǎng)基,、添加劑、血清及相關(guān)生長因子,、試劑等,；

三、iPS細胞
      iPS細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層在）,；
      iPS細胞增殖及冷凍保存,；
      iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實習(xí)；
      新藥及實驗儀器上市前評估,；

四,、技術(shù)外包服務(wù)：各類細胞生物學(xué)實驗、分子生物學(xué)實驗,、顯微鏡拍照服務(wù)等

五,、其他：根據(jù)客戶需要定制服務(wù)等