細胞名稱  草魚腎細胞；GIK品牌
形態(tài)特性 上皮細胞樣

生長特性 貼壁生長

特征特性 GIK細胞是長江水產所建立鑒定的多株草魚腎細胞之一,，貼壁生長,，常用于魚類疫病研究，尤其是病毒研究,。

培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS　

傳代方法 1：

3傳代,2-3天傳一代  

傳代情況 C5

凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　

支原體檢測 陰性　

STR STR鑒定

同工酶

染色體

使用權限 A類

草魚腎細胞,；GIK品牌操作流程：

※主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡），co2孵箱,。
※細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
  ?細胞的復蘇培養(yǎng):從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,同時不斷搖動使之迅速融化,，然后用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
  ?細胞傳代:原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次,，細胞長至60%～70%融合時,，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁,、懸浮,、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,，獲得細胞懸液,，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻,，吸管分裝混合液,，傳代擴增細胞。
  ?細胞形態(tài)的觀察:在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征,。
  ?生長曲線:取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機取3孔,，計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續(xù)計數10d,，繪制細胞生長曲線
  ?細胞的貼壁率:指數生長期的細胞,，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,，每兩小時隨機取出3瓶細胞,，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化,、計數已貼壁細胞,，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100％,，計算貼壁率,。
   ?細胞的計數:常規(guī)消化細胞，待細胞變圓,、脫壁并浮起,，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液,。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,，用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數,。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104,。

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