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大鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)

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大鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)

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  (四)競爭法  競爭法可用于測定抗原,,也可用于測定抗體,。以測定抗原為例,受檢抗原和酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合,,因此結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量呈反比,。操作步驟如下: ?。?)將特異抗體與固相載體連接,形成固相抗體,。洗滌,。 ?。?)待測管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液,,使之與固相抗體反應(yīng)。如受檢標(biāo)本中無抗原,,則酶標(biāo)抗原能順利地與固相抗體結(jié)合,。如受檢標(biāo)本中含有抗原,則與酶標(biāo)抗原以同樣的機(jī)會與固相抗體結(jié)合,,競爭性地占去了酶標(biāo)抗原與固相載體結(jié)合的機(jī)會,,使酶標(biāo)抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標(biāo)抗原,,保溫后,,酶標(biāo)抗原與固相抗體的結(jié)合可達(dá)zui充分的量。洗滌,。  ?。?)加底物顯色:參考管中由于結(jié)合的酶標(biāo)抗原zui多,故顏色zui深,。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差,,代表受檢標(biāo)本抗原的量。待測管顏色越淡,,表示標(biāo)本中抗原含量越多,。;  (五)捕獲法測IgM抗體  血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在,,后者會干擾IgM抗體的測定,。因此測定IgM抗本多用捕獲法,先將所有血清IgM(包括異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上,,在去除IgG后再測定特異性IgM,。操作步驟如下:  (1)將抗人IgM抗體連接在固相載體上,,形成固相抗人IgM,。洗滌?! ,。?)加入稀釋的血清標(biāo)本:保溫反應(yīng)后血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質(zhì)成分?! ,。?)加入特異性抗原試劑:它只與固相上的特異性IgM結(jié)合。洗滌,?! 。?)加入針對特異性的酶標(biāo)抗體:使之與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)結(jié)合,。洗滌,。 ?。?)加底物顯色:如有顏色顯示,,則表示血清標(biāo)本中的特異性IgM抗體存在,是為陽性反應(yīng),。; ?。?yīng)用親和素和生物素的ELISA  親和素是一種糖蛋白,可由蛋清中提取,。分子量60kD,,每個分子由4個亞基組成,可以和4個生物素分子親密結(jié)合?,F(xiàn)在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉和素(strepavidin),。生物素(biotin)又稱維生素H,分子量244.31,,存在于蛋黃中,。用化學(xué)方法制成的衍生物,生物素-羥基琥珀亞胺酯(biotin-hydroxysuccinimide,,BNHS)可與蛋白質(zhì),、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物。親和素與生物素的結(jié)合,,雖不屬免疫反應(yīng),,但特異性強(qiáng),親和力大,,兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定,。由于1個親和素分子有4個生物素分子的結(jié)合位置,可以連接更多的生物素化的分子,,形成一種類似晶格的復(fù)合體,。因此把親和素和生物素與ELIS偶聯(lián)起來,就可大提高ELISA的敏感度,。;  親和素-生物素系統(tǒng)在ELISA中的應(yīng)用有多種形式,,可用于間接包被,亦可用于終反應(yīng)放大??梢栽诠滔嗌舷阮A(yù)包被親和素,原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結(jié)合,,通過親和素-生物素反應(yīng)而使生物素化的抗體或抗在相化,。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量,而且使其結(jié)合點充分暴露,。另外,,在常規(guī)ELISA中的酶標(biāo)抗體也可用生物素化的抗體替代,然后連接親和素-酶結(jié)合物,,以放大反應(yīng)信號,。;ELISA 普遍用作非放射性同位素的成鍵化驗. 在這種方法中, 通常標(biāo)準(zhǔn)配體是固定的, 通過加入溶液相受體或蛋白質(zhì)來使之成鍵. 通過加入與受體特異性反應(yīng)的抗體來定量成鍵的受體, 而且zui初抗體的量以加入第二種能顯色的抗體測量. 第二種抗體能識別抗體的末端, 在其末端的堿性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發(fā)生反應(yīng), 從而使溶液顯色.;免疫檢測的基礎(chǔ)知識ELISA是一種免疫測定。免疫測定(immunoassay,,IA)是應(yīng)用免疫學(xué)技術(shù)測定標(biāo)本的方法,。在臨床檢驗中主要通過抗原抗體反應(yīng)檢測體液中的抗體或抗原性物質(zhì)。1.1 抗原  抗原是能在機(jī)體中引起特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì),??乖M(jìn)入機(jī)體后,可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和引起細(xì)胞免疫,。在免疫測定中,,抗原是指能與抗體結(jié)合的物質(zhì)。能在機(jī)體中引起抗體產(chǎn)生的抗原多為分子量大于5000的蛋白質(zhì),。小分子化合物在與大分子蛋白質(zhì)結(jié)合后能引起機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體的,,稱為半抗原(hapten)。例如某些激素,、藥物等,。抗原的反應(yīng)性取決于抗原決定簇(antigenic determinant),,或稱為表位(epitope),。一個抗原分子可帶有不同的決定簇。

Hu人激肽釋放酶6(KLK6)

大鼠游離三碘甲狀腺原氨酸(Free-T3)

豚鼠免疫球蛋白G(IgG)

Hu人第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)

Hu人抗神經(jīng)元核抗體2型/抗Ri抗體(ANNA-2/Ri)

Rat interferon-inducible protein 10,IP-10 ELISA Kit

Mo小鼠肌鈣蛋白T(Tn-T)

Human anti-B burgdorleri antibody,BB-Ab ELISA Kit

大鼠β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)

鴨白介素4(IL-4)

Hu人激肽釋放酶6(KLK6)

Human Klotho ELISA kit

Hu人前列腺素F(PGF)

Mo小鼠橫紋肌輔肌動蛋白α(smActinin-α)

Monkey Interferon γ ,IFN-γ ELISA Kit

6) 標(biāo)定含量,。20-30次測定結(jié)果刪除>±2SD數(shù)據(jù)的均值作為靶值,,并與已知定值血清對  比測定。5.3 室內(nèi)質(zhì)量控制程序  臨床檢驗的檢測結(jié)果,,每次或每天之間不可能*,。決定允許的誤差范圍,以臨床上不造成誤診與漏診為準(zhǔn),,通過以下步驟來確定質(zhì)控范圍,。

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