大鼠骨保護(hù)素配體(OPGL)試劑盒

大鼠骨保護(hù)素配體(OPGL)試劑盒——依托復(fù)旦大學(xué),，集研發(fā)、銷售,、實(shí)驗(yàn)室技術(shù)服務(wù)的產(chǎn)品涉及分子生物學(xué),、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)菌學(xué),、遺傳學(xué),、免疫學(xué)、生物化學(xué),、蛋白質(zhì)學(xué),、細(xì)胞治療、臨床應(yīng)用等領(lǐng)域,。

類別簡介:"專業(yè)經(jīng)營進(jìn)口胎牛血清,、細(xì)胞因子、ELISA試劑盒,、細(xì)胞,、抗體、生物試劑,、耗材,、培養(yǎng)基、一抗,、二抗,、其產(chǎn)品吸附均勻，吸附性好,，空白值低,，孔底透明度高， 代做ELISA實(shí)驗(yàn)等,。"

供應(yīng)商 :乾思生物

貨期 :7-10天

◇      液體類標(biāo)本:標(biāo)本必須為液體,，不含沉淀。包括血清、血漿,、尿液、胸腹水,、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等,。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿,。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測種類。

◇      血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。收集上清。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

◇      血漿：應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

◇      尿液,、胸腹水,、腦脊液：用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。

◇      細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí),，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

1.  試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭,，避免交叉污染,。

2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,，酶結(jié)合物或底物時(shí),，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時(shí)間,，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用多道移液器加樣,。

3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度,。

4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印,，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。

5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時(shí)離心處理,，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底,。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液,、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆,。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時(shí)，一次不要小于10μl),，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差,；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液,。

6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù),。

7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射,。建議檢測樣品時(shí)均設(shè)雙孔測定,，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高,，請先稀釋后再測定，計(jì)算時(shí)請后乘以稀釋倍數(shù),。

◇      注意事項(xiàng)：收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定,，對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本，儲存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本,，將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融,，標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí),，-20℃可保存1個(gè)月，-70度可保存6個(gè)月,。

完整的ELISA試劑盒包含以下各組分： (1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑),； (2)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物)； (3)酶的底物,； (4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),，參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中)； (5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液,； (6)洗滌液,，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水,； (7)酶反應(yīng)終止液,，常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液終體積而異,，在板式ELISA中一般采用3mol/L,。主要包括37000多種一抗，1689種二抗,，61種標(biāo)簽和標(biāo)記物及42種試驗(yàn)小包裝產(chǎn)品,。

具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,，鎂離子）洗1-2次,。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后,，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,，細(xì)胞隨即脫落下來,。
3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出,，分到新的培養(yǎng)瓶中,。一傳二。傳代后一半用我們的培養(yǎng)基,，一半用你們的,，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長不好。

注：（1）各種試劑禁忌常年續(xù)加,；
（2）同一品牌不同批號的試劑不能混用,；
（3）續(xù)加試劑后要重新定標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)液即開即用,；
（4）不同廠家的試劑禁用同一標(biāo)準(zhǔn)液定標(biāo),；
（5）質(zhì)控必須用高、中,、低值三個(gè)樣本每天隨患者標(biāo)本測定,；
(6) 抗凝劑的使用；
(7) 校準(zhǔn)液的正確使用,。如果細(xì)胞未長滿,，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作,，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，吸出培養(yǎng)液，僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng),。如果細(xì)胞已長滿,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng).