常規(guī)PCR Kit （一步法）

Venor®Gem OneStep

常規(guī)PCR Kit（一步法）介紹：

常規(guī)PCR法：是根據(jù)支原體核糖體16s-23s rRNA的特異保守序列設計引物，對待檢樣本DNA進行擴增,，通過對擴增產(chǎn)物的大小分析作出診斷,。

優(yōu)點：①靈敏度高，特異性好,。②時間短,，2-3小時出結果。③符合歐洲藥典,。④操作簡單,。

缺點：①對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中,，PCR結果會出現(xiàn)假陽性,。（可用培養(yǎng)法做補充驗證）。②不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質量差異巨大（由于引物及內在設計不同）,，需謹慎選擇,，盡量在專業(yè)人員推薦指導下使用,。

『支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒』介紹：

德國MB公司生產(chǎn)的支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒，依據(jù)操作步驟的細微差別,，分一步法和經(jīng)典法兩類,。此兩類試劑盒較全球其他廠家同類產(chǎn)品，具有以下*的優(yōu)點：

①高特異性,，270bp左右的一條陽性對照條帶,，涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種，操作簡單,，結果易于觀察,。（使用MB的試劑盒，下表列出的支原體物種均為陽性,，其他微生物或真核細胞均為陰性,。根據(jù)16s rRNA序列的同源性比對，該試劑盒可檢測出1種脲原體,、7種無膽甾原體和85種支原體,。）

②高靈敏度，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出,。

③試劑盒含內控對照,，可防止假陰性的發(fā)生,。

④符合歐洲藥典要求,。

常規(guī)PCR Kit（一步法）適用范圍：

A. 科研用戶，細胞上清的篩查可選用MB公司生產(chǎn)的支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒（一步法）,。（詳見下文）

【Venor® Gem OneStep (貨號:11-8050)】或【Venor® Gem Advance (貨號: 11-7096)】

B. 對于需遵循藥典要求的生物制藥企業(yè),，可選用MB公司生產(chǎn)的支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒（經(jīng)典法）。

【Venor® Gem Classic(貨號: 11-1050) 】+ Taq酶  (貨號: 53-1050)】

或【Venor® Gem Classic  (貨號: 11-1050G)】

特點：

1. 內控對照已加在預混液中,，無需另外配置,，使用便捷。
2.高特異性,，僅一條陽性對照條帶,，即可涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種。

操作簡單,，易于觀察,。

3.高靈敏度，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出,。
4.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出,。該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種無膽甾原體和85種支原體,。

操作步驟：

下列圖示以Venor® Gem OneStep?支原體?常規(guī)PCR?檢測試劑盒?(一步法)( 貨號：11-8050)  為例,，具體產(chǎn)品操作以說明書為準,。

第1步：樣本處理

第2步：試劑制備

第3步：PCR體系建立

第4步：啟動PCR反應

第5步：電泳結果分析

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常,。

當樣本存在支原體污染時,，由于內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如支原體DNA＞103拷貝）,。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝,，內控對照條帶會*消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶,，此條帶不影響檢測結果,。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內控對照條帶變弱（和陰性對照相比）,，此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒）,，然后再檢測。

儲存條件

2~8℃至少12個月,。復溶后必須在-18℃保存,。

效期

1年6個月