常規(guī)PCR Kit （一步法）

Venor®Gem OneStep

常規(guī)PCR Kit（一步法）介紹：

常規(guī)PCR法：是根據(jù)支原體核糖體16s-23s rRNA的特異保守序列設(shè)計(jì)引物，對待檢樣本DNA進(jìn)行擴(kuò)增,，通過對擴(kuò)增產(chǎn)物的大小分析作出診斷,。

優(yōu)點(diǎn)：①靈敏度高，特異性好,。②時間短,，2-3小時出結(jié)果。③符合歐洲藥典,。④操作簡單,。

缺點(diǎn)：①對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中,，PCR結(jié)果會出現(xiàn)假陽性,。（可用培養(yǎng)法做補(bǔ)充驗(yàn)證）。②不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大（由于引物及內(nèi)在設(shè)計(jì)不同）,，需謹(jǐn)慎選擇,，盡量在專業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用。

『支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒』介紹：

德國MB公司生產(chǎn)的支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒,，依據(jù)操作步驟的細(xì)微差別,，分一步法和經(jīng)典法兩類。此兩類試劑盒較全球其他廠家同類產(chǎn)品,，具有以下*的優(yōu)點(diǎn)：

①高特異性,，270bp左右的一條陽性對照條帶，涵蓋了所有可能感染細(xì)胞的支原體物種,，操作簡單,，結(jié)果易于觀察。（使用MB的試劑盒,，下表列出的支原體物種均為陽性,，其他微生物或真核細(xì)胞均為陰性。根據(jù)16s rRNA序列的同源性比對,，該試劑盒可檢測出1種脲原體,、7種無膽甾原體和85種支原體。）

②高靈敏度,，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出,。

③試劑盒含內(nèi)控對照，可防止假陰性的發(fā)生,。

④符合歐洲藥典要求,。

常規(guī)PCR Kit（一步法）適用范圍：

A. 科研用戶，細(xì)胞上清的篩查可選用MB公司生產(chǎn)的支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒（一步法）。（詳見下文）

【Venor® Gem OneStep (貨號:11-8050)】或【Venor® Gem Advance (貨號: 11-7096)】

B. 對于需遵循藥典要求的生物制藥企業(yè),，可選用MB公司生產(chǎn)的支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒（經(jīng)典法）,。

【Venor® Gem Classic(貨號: 11-1050) 】+ Taq酶  (貨號: 53-1050)】

或【Venor® Gem Classic  (貨號: 11-1050G)】

特點(diǎn)：

1. 內(nèi)控對照已加在預(yù)混液中，無需另外配置,，使用便捷,。
2.高特異性，僅一條陽性對照條帶,，即可涵蓋所有可能感染細(xì)胞的支原體物種,。

操作簡單，易于觀察,。

3.高靈敏度,，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。
4.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出,。該試劑盒可檢測出1種脲原體,、7種無膽甾原體和85種支原體。

操作步驟：

下列圖示以Venor® Gem OneStep?支原體?常規(guī)PCR?檢測試劑盒?(一步法)( 貨號：11-8050)  為例,，具體產(chǎn)品操作以說明書為準(zhǔn),。

第1步：樣本處理

第2步：試劑制備

第3步：PCR體系建立

第4步：啟動PCR反應(yīng)

第5步：電泳結(jié)果分析

191bp為內(nèi)控對照條帶，表明PCR反應(yīng)正常,。

當(dāng)樣本存在支原體污染時,，由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）,。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝,，內(nèi)控對照條帶會*消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶,，此條帶不影響檢測結(jié)果,。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ê完幮詫φ障啾龋?，此時應(yīng)先進(jìn)行DNA抽提（推薦使用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒）,，然后再檢測。

儲存條件

2~8℃至少12個月,。復(fù)溶后必須在-18℃保存,。

效期

1年6個月