ClonePix 2高通量細胞克隆篩選系統(tǒng)

ClonePix 2高通量細胞克隆篩選系統(tǒng)全自動的篩選流程可以在更短時間內(nèi)篩選更多克隆。經(jīng)過已有用戶證明,，可以顯著提高篩選效率,、克隆產(chǎn)量，并節(jié)省時間和成本,。

主要特性：

1.更短時間篩選更多克隆

2.優(yōu)質(zhì)圖像結合智能化分析軟件

3.準確,、自動化克隆挑選，避免有限稀釋,

4.增加生物治療藥物細胞系的產(chǎn)量

創(chuàng)新的篩選流程更少時間篩選更多克隆

縮短細胞系和抗體開發(fā)時間

挑取表達水平更優(yōu)的細胞克隆

1.使用半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞,，獲得獨立的單個細胞克隆

2.可以快速篩選上萬個克隆

 - 大大增加找到更優(yōu)克隆的概率

 - 白光成像用于識別克隆位置

 - 熒光成像用于定量表達水平

3.多種檢測方法可選

 - 不用標記,，直接檢測雜交瘤分泌的 IgG 或抗原特異性 MAbs

 - 檢測加入標記的重組蛋白或表達的熒光標記蛋白

4.客觀的成像分析，使用戶可以準確篩選到更優(yōu)表達水平的克隆,，并盡可能早的排除表達水平低的干擾克隆

5.根據(jù)克隆表達水平自動排序,，并準確、自動化挑取克隆,，避免有限稀釋的繁瑣和出錯幾率,。

滿足藥品監(jiān)管的要求

針對人 IgG 的項目，使用不含動物源成份的試劑：CloneMedia,，CloneMatrix,，Recombinant CloneDetect 以及 XP media。

確保形成獨立的單克隆

使用 CloneMedia 半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞,，有利于增加鋪板效率和形成獨立單個克隆,，有利于克隆識別和挑取,。

1.基于多種基礎培養(yǎng)基，針對 ClonePix 系統(tǒng)的應用進行專門優(yōu)化

2.適用于多種細胞,，經(jīng)過優(yōu)化和驗證的培養(yǎng)基可選：Per.C6,，CHO-s，CHO DG44,，HEK,，CHOK1SV，雜交瘤以及骨髓瘤細胞等

3.有標準成份,，無動物源成份以及無谷氨酰胺成份等多種培養(yǎng)基可選,

4.使用 CloneMatrix 甲基纖維素濃縮液,，用戶自己配制特殊用途培養(yǎng)基

CloneMedia 培養(yǎng)基獲得的克隆，使用 CloneSelect Imager 成像

不同于傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法,，半固體培養(yǎng)基的細胞鋪板密度更高,，并且可以保證形成獨立的單個克隆，有利于下一步單克隆的挑取,。

一個成熟的培養(yǎng)方法

使用半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞形成克隆,，這種方法已經(jīng)非常完善：

“EASIER TO PLATE OUT LARGE NUMBERS OF CELLS AND TO RECOVER MANY INDEPENDENT HYBRIDOMA CLONES”

A simple, single-step technique for selecting and cloning hybridomas for the production of monoclonal antibodies (J. Immun. Methods (1982) 50, 161-171)

目標蛋白檢測

使用基于熒光的方法檢測分泌蛋白

熒光耦聯(lián)的 CloneDetect 檢測試劑可以原位檢測分泌表達的人、小鼠以及大鼠抗體,。因為克隆本身不需要產(chǎn)生熒光,，所以不需要對目標蛋白加入額外熒光標記分子。

1.根據(jù)實驗檢測要求以及表達蛋白類型,，選擇合適的檢測試劑,，比如 FITC 標記抗人檢測試劑

2.加入液體檢測試劑到半固體培養(yǎng)基

3.對克隆進行成像、分析并根據(jù)所有克隆的熒光信號水平進行排序

檢測方法的選擇

檢測分泌 IgG 的單克隆抗體

高質(zhì)量成像,，智能化分析

成像

1.白光和熒光成像可以用于計算克隆的大小以及熒光強度（代表目標蛋白的表達量）,。

數(shù)據(jù)顯示

1.軟件根據(jù)克隆的熒光強度、大小等物理參數(shù)對克隆自動進行排序,，得到所有克隆的 2D 柱狀圖表,。

2.克隆的篩選和選取主要依據(jù)以下參數(shù)：

- 大小，邊緣圓度以及克隆距離

- 根據(jù)熒光強度排序

- 用戶可以通過軟件中設置“proximity”的值,，去掉距離太近的克隆

數(shù)據(jù)追蹤

1.軟件自動將所有克隆的統(tǒng)計信息排列成表,，可以隨時導出想要克隆的信息

2.軟件按照用戶自定義的順序挑取克隆到 96 孔板，并自動記錄克隆來源,、位置信息以及熒光強度等統(tǒng)計學參數(shù)

克隆挑取和轉移

1.用戶可以根據(jù)成像數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析的結果自定義要挑取的克隆數(shù)目和挑取順序

2.系統(tǒng)自動選擇用戶自定義的克隆,，并將每個克隆轉移到 96 孔目標微孔板，用于培養(yǎng)后進一步分析或克隆擴大培養(yǎng)

3.XP Medi a CHO Growth A 是針對 CloneMedi a CHO Growth A 半固體培養(yǎng)基專門優(yōu)化,，適用于挑取克隆進一步放大培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基,，可以獲得更好的挑取后生長效果。

快速篩選特異性抗體克隆

ClonePix 系統(tǒng)可以從融合后自動化篩選，一步找到目標雜交瘤克??；是一個高效的自動化篩選方法。

1.篩選更多克隆——發(fā)現(xiàn)更多的陽性克隆

2.實驗過程更加快速高效,，e.g.7-10 天可以篩選到 100-500 個特異性雜交瘤克隆

3.通過避免陽性克隆的丟失以及早期排除陰性克隆，大大節(jié)省下游工作時間和成本

4.原位篩選抗原特異性或者分泌 IgG 雜交瘤——適用于多種類型抗原分子（從 160 KD 的復合體蛋白到 2.6 KD 的磷酸肽）

快速檢測抗原特異性IgG克隆

FITC 標記 60 KD 抗原

快速從退化克隆中篩選高產(chǎn)克隆

一些雜交瘤細胞系在 MAb 的產(chǎn)量方面退化嚴重,，或者分泌性比較差,。已有用戶使用 ClonePix 系統(tǒng)從退化的克隆中成功恢復了高產(chǎn)克隆株。

增加生物藥物細胞系的產(chǎn)量

ClonePix 系統(tǒng)相比傳統(tǒng)方法,，可以在短時間內(nèi)篩選更多的克隆,，能夠大大增加找到稀少的高產(chǎn)克隆的概率。通過下面的實例 (MedImmune LLC),，比較了傳統(tǒng)的有限稀釋和 ClonePix系統(tǒng)的有效性,。

更短時間篩選更多克隆

原位熒光顯示高產(chǎn)細胞株，早期排除不需要的克隆

在工藝進一步優(yōu)化前即獲得高產(chǎn)克隆 (NS/O: 4-5 g/L,，CHO: 5-6 g/L)

細胞系穩(wěn)定性

表達量不穩(wěn)定是細胞系篩選早期階段的主要問題,。ClonePix 系統(tǒng)可以直觀分析克隆的穩(wěn)定性。

把篩選到的克隆鋪到半固體培養(yǎng)基,，4-7 天培養(yǎng)后,，使用 ClonePix 進行成像分析，比較子代克隆和親代克隆的表達量,，驗證克隆穩(wěn)定性,。也可以培養(yǎng) 7-14 天后，重新對亞克隆進行篩選,。

經(jīng)過兩輪篩選之后穩(wěn)定性細胞系數(shù)據(jù)