【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用,，不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,，請仔細閱讀購買說明,！

產(chǎn)品名稱：吲哚乙酸氧化酶活性檢測試劑盒

規(guī)格：50管/48樣、100管/96樣

測試方法：微量法,、可見分光光度法

貨號：YS-01S6698

測定意義：

吲哚乙酸（IAA）在吲哚乙酸氧化酶的作用下,，被氧化破壞失去活性。植物體內(nèi)吲哚乙酸氧化酶活力的大小,，對調(diào)節(jié)體內(nèi)吲哚乙酸的水平,，起著重要的作用，而影響植物的生長,。

測定原理：

在無機酸存在情況下,，吲哚乙酸能與FeCl3作用，生成紅色螯合物,，該物質在530nm處有最大吸收峰,，酶活力的大小可以其破壞吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法測定,。

自備儀器和用品：

低溫離心機,、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器,、可見分光光度計,、1.5mL離心管、1mL玻璃比色皿,、和蒸餾水,。

樣品制備：

1）直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品，體積可達2.000ml,。

2）過濾混濁溶液,。

3）除去樣品中的CO2 。

4 ）加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0,。

5 ）調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0,，孵育約15分鐘。

6 ）用空白樣品做對照測定有色樣品（如有必要調(diào)整PH值至8.0）,。

7 ）用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品,。

8 ）壓碎,、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取,。

9 ）用Carrez試劑將含有蛋白質的樣品去蛋白,。

10）含脂肪的樣品用熱水提取。

吲哚乙酸氧化酶活性檢測試劑盒特點：

(1)應用廣泛

由于各種各樣的無機物和有機物在紫外可見區(qū)都有吸收,，因此均可借此法加以測定,。到目前為止，幾乎化學元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法,。

(2)靈敏度高

由于相應學科的發(fā)展,，使新的有機顯色劑的合成和研究取得可喜的進展，從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步,。特別是由于多元絡合物和各種表面活性劑的應用研究,，使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對于其它痕量分析方法而言,，光度法的精密度和準確度一致是比較高的,。不但在實際工作中光度法被廣泛采用，在標準參考物質的研制中,，它更受重視,，很多光度分析法已制定成為標準方法。

(3)選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當?shù)娘@色條件就可直接進行光度法測定,，如鈷,、鈾、鎳,、銅,、銀、鐵等元素的測定,，已有比較滿意的方法了,。

(4)準確度高

對于一般的分光光度法來說，其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內(nèi),，如采用示差分光度法測量,，則誤差往往可減少到千分之幾。

(5)適用濃度范圍廣

可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預富集后),。

(6)分析成本低,、操作簡便、快速,。

操作步驟：

實驗開始前,，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時,，均需混勻,，混勻時盡量避免起泡,。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時,，應對樣品進行稀釋,，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù),。

加樣：分別設空白孔,、標準孔,、待測樣品孔,。空白孔加樣品稀釋液100μl,，余孔分別加標準品或待測樣品100μl,，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜,，37℃反應120分鐘,。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液,。

去液體,，甩干，不用洗滌,。每孔加檢測溶液A工作液100μl（在使用前一小時內(nèi)配制）,，酶標板加上覆膜，37℃反應60分鐘,。

溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體，甩干,，洗板3次,，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）,。

每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘,。

溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體，甩干,，洗板5次,，每次浸泡1-2分鐘,，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）,。

依序每孔加底物溶液90μl,，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,，后3-4孔梯度不明顯,，即可終止）。

依序每孔加終止溶液50μl,，終止反應,，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實驗結果的準確性,，底物反應時間到后應盡快加入終止液。