穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株構(gòu)建實(shí)驗(yàn)

  穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株（穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株）指在細(xì)胞中持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)特定基因或干擾特定基因表達(dá),。穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細(xì)胞染色體上,，使細(xì)胞長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)該基因。

 在基因功能的研究中,，基因是否有效轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞,，是功能研究的前提條件之一。而穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株則彌補(bǔ)了瞬時(shí)感染（或轉(zhuǎn)染）一些功能實(shí)驗(yàn)中由于外源基因表達(dá)時(shí)間短的缺陷,，便于長(zhǎng)期觀察基因?qū)τ诩?xì)胞功能的影響以及蛋白間相互作用,。

用轉(zhuǎn)染質(zhì)粒或病毒侵染的方法將構(gòu)建好的含靶基因的載體導(dǎo)入細(xì)胞,，根據(jù)不同的基因載體中所含的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物進(jìn)行篩選混合陽(yáng)性克隆,。在陽(yáng)性混合克隆的基礎(chǔ)上，得到單細(xì)胞長(zhǎng)出的陽(yáng)性單克隆,，繼而得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,。常用的真核表達(dá)載體的抗性標(biāo)志物有嘌呤霉素（puromycin）、潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin）,。

上海生物有著多年構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的經(jīng)驗(yàn),，已在H1299、THP-1,、MCF7/ADR,、A549、V79,、MC3T3-E1,、CHO,、SiHa、3D4/2,、HL7702,、SW480、HepG2,、SGC-7901,、MGC-803、HT-29,、Saos-2,、U-2os,、PC12,、SK-BR-3、MCF-7,、HMSC-ad ,、GIST-T1、HEK293,、293T等多個(gè)種屬細(xì)胞中成功構(gòu)建過(guò)表達(dá)和RNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,。
   產(chǎn)品特點(diǎn)：
   1、穩(wěn)定：15代以內(nèi)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá),。
   2,、迅速：一般控制在1個(gè)月以內(nèi)完成構(gòu)建。
   3,、經(jīng)濟(jì)：價(jià)格實(shí)惠,，性價(jià)比高。
   4,、質(zhì)量：對(duì)外源基因進(jìn)行嚴(yán)格鑒定,。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株構(gòu)建實(shí)驗(yàn)的兩種方法
   1、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后,，單克隆方法篩選穩(wěn)定細(xì)胞系,。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率較低。對(duì)于基因過(guò)表達(dá),，如果轉(zhuǎn)染效率達(dá)到40%,，基因過(guò)表達(dá)尚可。但是對(duì)于基因干擾實(shí)驗(yàn),，對(duì)轉(zhuǎn)染效率要求遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于基因過(guò)表達(dá),，通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無(wú)法滿足。另外,，質(zhì)粒游離于細(xì)胞質(zhì)中,，很快降解,，無(wú)法滿足較長(zhǎng)時(shí)間的檢測(cè)項(xiàng)目；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低,，穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建耗時(shí)耗力,，且得率很低，往往需要挑取單克隆株,。

   2,、病毒感染篩選穩(wěn)定細(xì)胞株
  病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩(wěn)定細(xì)胞系篩選方法,。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,，由于其高效整合、高效轉(zhuǎn)錄,、高效表達(dá),、宿主范圍廣，感染效率高,，且與細(xì)胞染色體整合而不發(fā)生基因重排,，是制備穩(wěn)定細(xì)胞株的理想載體。

  穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)流程
   1,、載體構(gòu)建：將外源基因構(gòu)建到合適的載體上,，如需病毒轉(zhuǎn)染，則包裝病毒,。
   2,、篩選濃度測(cè)定：以 10-14 天細(xì)胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。
   3,、細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前天接種細(xì)胞,，各種細(xì)胞的平板密度依據(jù)各種細(xì)胞的生長(zhǎng)率和細(xì)胞形狀而定。進(jìn)行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞應(yīng)達(dá)到 60%-80% 覆蓋,。
   4,、細(xì)胞轉(zhuǎn)染：用構(gòu)建好的載體（或包裝好的病毒）轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞。
   5,、抗生素篩選,。
   6、鑒定篩選結(jié)果,。

   客戶需要提供
   1,、構(gòu)建好的外源基因載體或基因模板。
   2,、待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系（ 1×106 個(gè)細(xì)胞,，可傳代，倍增時(shí)間小于 48 小時(shí)），特殊細(xì)胞需提供培養(yǎng)基,。
 
我們提供
   1,、構(gòu)建好的外源基因載體。
   2,、構(gòu)建好的穩(wěn)定細(xì)胞系,。
   3、構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)報(bào)告及相關(guān)的外源基因表達(dá)分析,。

目前,，上海申知心生物科技有限公司，主營(yíng)實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù),、服務(wù),、動(dòng)物模型構(gòu)建、細(xì)胞株,、elisa試劑盒等,，歡迎廣大科研愛(ài)好者前來(lái)咨詢選購(gòu)！