勝創(chuàng)生物秋爽價震撼來襲！

                                                                 活動時間：8月15日-9月24日

T4 DNA連接酶（快速）

Enzymatics T4 DNA連接酶（快速）秋爽價*

產(chǎn)品描述
T4 DNA連接酶催化雙螺旋DNA或RNA的5′磷酸末端基團和3′羥基末端基團之間形成磷酸二酯鍵,。該酶能夠有效的連接平末端和黏性末端，同時修復雙螺旋DNA,、RNA或DNA/RNA雜交鏈中的單鏈缺口。

蛋白來源
攜帶克隆的T4 DNA連接酶基因的重組大腸桿菌菌株,。
組成成分：
10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
50% glycerol
pH 7.5 @ 25°C
隨酶提供：
B1010 (2X Rapid Ligation Buffer)
B6030 (10X T4 DNA Ligase Buffer)
2X Rapid Ligation Buffer (B1010):
132mM Tris-HCI
20 mM MgCl2
2 mM DTT
2 mM ATP
15% PEG 6000
pH 7.6 @ 25°C
10X T4 DNA Ligase Buffer (B6030):
500mM Tris-HCI
100 mM MgCl2
50 mM DTT
10 mM ATP
pH 7.6 @ 25°C
Enzymatics T4 DNA連接酶（快速）秋爽價*
單位定義
1 unit 被定義為23°C下、30分鐘內(nèi),，在50 μl 1X T4 DNA連接酶緩沖液中能夠連接50%的具有粘性末端的100 ng DNA片段的DNA連接酶量。

產(chǎn)品信息
T4 DNA Ligase (Rapid)
Part Number  L6030-HC-F
Concentration  600,000 U/ml
Unit Size            26,000 U
SDS          Available on request

產(chǎn)品特性
Storage Temperature     -25 to -15°C
Test                           Specification
Purity (SDS-PAGE)           >99%
Specific Activity        300,000 U/mg
SS Exonuclease      6,000 U <1.0% released
DS Exonuclease      6,000 U <1.0% released
DS Endonuclease     6,000 U = no conversion
E.coli DNA Contamination 6,000 U <10 copies

產(chǎn)品要點：
T4 DNA連接酶是ATP依賴的酶,。建議舍棄在-20°C儲存一年的反應緩沖液,，用新鮮的緩沖液代替以確保zui大性能。當把一個嵌入物當做目標靶物：矢量比在2到6之間時,，單個嵌入的連接反應是*的,。6:1以上的比率將會促進多重片段的嵌入,，當下降到2:1比率時，將會降低連接效率,。
對于有疑問的連接反應或如果DNA濃度是未知的,，那就有必要將比率多樣化并進行多重連接反應,。
高濃度的PEG將會顯著的降低電能細胞的轉(zhuǎn)化效率。為了將電能細胞轉(zhuǎn)化效率zui大化,，下面給出寫*的方法：
的：在接下來的連接反應中，利用DNA凈化吸附柱來凈化產(chǎn)物,，并用50uL的TE洗提,。DNA即準備轉(zhuǎn)化。DNAzui終被轉(zhuǎn)化的量應該在0.1-10 ng的范圍之間,。
較好的：在ddH20 或TE中稀釋連接產(chǎn)物將會降低PEG濃度,。DNAzui終被轉(zhuǎn)化的量應該在0.1-10 ng的范圍之間。
高濃度的T4 DNA連接酶與2X快速連接緩沖液相結(jié)合能夠顯著提高平末端連接的速度和效率,，因此不建議有較長的潛伏期（>10分鐘），因為長的潛伏期能夠顯著的降低連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化效率,。為了將正確嵌入或矢量結(jié)合的轉(zhuǎn)化效率zui大化,，建議使用下面的方案,。
酶的10X T4 DNA連接酶緩沖液不包含PEG，并與標準連接反應方案*,，該方案并沒利用快速的緩沖區(qū)規(guī)格,。

操作說明：
反應體系:
體積                   組分                                 終濃度
10 μL      2X Rapid Ligation Buffer              1X
X μL                Vector                                1-10 ng/μL
X μL               Insert                                      1-10 ng/μL
1 μL        T4 DNA Ligase (600 U/ μL)          30 U/μL
X μL            Type I Water                              N/A
20 μL                                                           總體積
加入以上所有成分于反應管中，吹打混勻,，25℃,，10min孵育,，立即使用PCR洗脫柱進行DNA的純化，洗脫于50ulTE或雙蒸水存儲或者直接進行稀釋（稀釋比例至少1：10）并進行轉(zhuǎn)化,，將0.1-10ng 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入相應載體的電轉(zhuǎn)或鈣轉(zhuǎn)的感受態(tài)細胞中,。

參考文獻
Engler, M.J. and Richardson, C.C. (1982) P.D. Boyer (Eds.), The Enzymes, 5, pp. 3. San Diego: Academic Press.

適用范圍
該產(chǎn)品被研制,、生產(chǎn)加工及銷售，僅用于體外,，不適用于人類和動物注射,。

活動將同步于丁香通8.24-9.24秋季*活動以及科苑商城店鋪*!

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