BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒 100T 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒zui經(jīng)典的一款

產(chǎn)品詳細(xì)信息

BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒說(shuō)明書(shū)
一、概述
在正常細(xì)胞中,，磷脂酰絲氨酸只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),，細(xì)胞發(fā)生凋亡zui早期，膜磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè),，這一變化早于細(xì)胞皺縮,、染色質(zhì)濃縮、DNA的片斷化和細(xì)胞膜的通透性增加等凋亡現(xiàn)象,。AnnexinV是一種磷脂結(jié)合蛋白,，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合,。因此AnnexinV被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一,。碘化丙啶（Propidium Iodide,PI）是一種核酸染料,，它不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，但凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞由于細(xì)胞膜通透性的增加,，PI能夠透過(guò)細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅,。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái),。

二,、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒的組份：

Product code Description
556547 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit I
Components:
556547a Annexin V Binding Buffer, 10X conc (51-66121E
556547b Annexin V-FITC (51-65874X)
556547c Propidium Iodide Staining Solution(51-66211E)

三、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒的操作步驟 ：
貼壁細(xì)胞需用0.25%的胰酶消化,。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞,。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的胰酶消化時(shí),，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合,，影響Annexin V的結(jié)合,。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集,。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘,；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（注：胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-FITC的結(jié)合）,，于室溫2000rpm離心5～10分鐘,，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次,，2000rpm離心5～10分鐘,，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞,；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,，避光，室溫孵育15分鐘,；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色,。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer,。

四,、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒的保存：

4℃保存，兩個(gè)月內(nèi)可保持穩(wěn)定,；避免反復(fù)凍融,。

五、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒的注意事項(xiàng) ：
（1）本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),，不適用于臨床檢測(cè),；
（2）PI（propidium iodide,，碘化丙錠）有毒性，能通過(guò)皮膚吸收,，對(duì)眼睛有刺激作用，使用時(shí)需戴手套,；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),，在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),，盡可能在暗處進(jìn)行,。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中,。細(xì)胞標(biāo)記后,，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,，勿用力吹打細(xì)胞,，盡量在4℃下操作，以免影響細(xì)胞狀態(tài),。
（5）在細(xì)胞洗滌的zui后一步,，請(qǐng)盡量將上清棄凈，以免PBS殘留,，有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè),。
（7）PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,，建議首*行Annexin V-FITC染色，zui短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色,。

Annexin V : FITC Apoptosis Detection Kit I產(chǎn)品介紹：
細(xì)胞凋亡是在胚胎發(fā)育或組織更新維護(hù)過(guò)程中的出現(xiàn)的一種正常生理過(guò)程,。細(xì)胞凋亡程序有顯著的形態(tài)學(xué)特征，包括質(zhì)膜不對(duì)性和吸附性的喪失,，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的皺縮,，DNA核小體分裂。質(zhì)膜溶解是zui早出現(xiàn)的特征,。在凋亡細(xì)胞中,，磷脂酰絲氨酸（PS）會(huì)從磷脂雙層內(nèi)部轉(zhuǎn)移到外部，使PS暴露在細(xì)胞外環(huán)境中,。 Annexin V是一個(gè)分子量為35-36 kDa的Ca2+依賴(lài)型磷脂結(jié)合蛋白質(zhì),，其對(duì)PS有高親和性，可以結(jié)合到暴露到質(zhì)膜外層的PS,。Annexin V可以結(jié)合熒光染料,，包括FITC,。這種結(jié)合既保留了對(duì)PS的高親和性，同時(shí)可以作為靈敏探針,，用流式細(xì)胞分析檢測(cè)鑒定正在凋亡的細(xì)胞,。由于PS變化出現(xiàn)在細(xì)胞凋亡早期，F(xiàn)ITC Annexin V染色可以更早地鑒定出調(diào)亡細(xì)胞,，比基于細(xì)胞核變化的檢測(cè),，例如DNA斷裂要早。

FITC標(biāo)記的 Annexin V 染色先于細(xì)胞凋亡或細(xì)胞壞死過(guò)程中伴隨產(chǎn)生的細(xì)胞膜完整性喪失的出現(xiàn),。因此,，利用FITC標(biāo)記的Annexin V染色時(shí)通常結(jié)合活體染料如碘化丙啶（PI）或7-Amino-Actinomycin（7-AAD），方便研究者鑒定出早期凋亡細(xì)胞（PI陰性,，F(xiàn)ITC Annexin V陽(yáng)性）,。具備完整細(xì)胞膜的活細(xì)胞可以阻止PI浸入，然而細(xì)胞膜壞死或破壞后就可以浸透PI,。例如,，活細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果應(yīng)該是FITC Annexin V 陰性和 PI 陰性；早期凋亡細(xì)胞是FITC Annexin V 陽(yáng)性 and PI 陰性,；晚期凋亡細(xì)胞或已死亡細(xì)胞是FITC Annexin V 陽(yáng)性和 PI陽(yáng)性,。此檢測(cè)不能區(qū)分出經(jīng)歷過(guò)凋亡的死細(xì)胞和經(jīng)歷其它壞死途徑的死細(xì)胞，因?yàn)槎叨紩?huì)同時(shí)被FITC Annexin V 和 PI染色,。然而,，持續(xù)觀察細(xì)胞凋亡都會(huì)經(jīng)歷三個(gè)階段：FITC Annexin V 和 PI 都是陰性（活細(xì)胞或沒(méi)有明顯細(xì)胞凋亡）；Annexin V陽(yáng)性 和 PI 陰性（凋亡早期,，具有完整細(xì)胞膜）,；FITC Annexin V and PI 都是陽(yáng)性（凋亡晚期或死亡）。經(jīng)歷這三個(gè)階段的細(xì)胞表明是經(jīng)歷細(xì)胞凋亡過(guò)程,。相反,，單一觀察顯示細(xì)胞FITC Annexin V和 PI都是陽(yáng)性不能反映出細(xì)胞是否經(jīng)歷凋亡過(guò)程。

Annexin V : FITC Apoptosis Detection Kit I產(chǎn)品組份：
Part A: 51-66121E, 10X Annexin V Binding Buffer, 50 ml
Part B: 51-65874X, FITC Annexin V , 0.5 ml (1 ea), Vol. per Test: 5 μl
Part C: 51-66211E, Propidium Iodide Staining Solution 2.0 ml (1 ea), Vol. per Test: 5 μl

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