CD34+造血干細胞是血液系統(tǒng)中的關鍵細胞,，具有自我更新和多向分化潛能,。通過轉(zhuǎn)染技術,，可以研究基因功能并開發(fā)新的治療策略,。ProteanFect Max作為一種高效的轉(zhuǎn)染試劑,，已被證明能顯著提高mRNA轉(zhuǎn)染效率,，且對細胞分化影響較小,。

2. 材料與方法

2.1 CD34+造血干細胞的分選

2.2 培養(yǎng)基的配制

• SFEM II培養(yǎng)基（Stemcell, 09655）和StemSpan™ CC100（Stemcell, 02690）以99:1比例混合,。
• 若添加抗生素,，需稀釋1000倍。
• 配制完成后,，培養(yǎng)基應放置于4°C冰箱儲存,，并盡量在1個月內(nèi)使用完。

2.3 細胞培養(yǎng)與傳代

• 分選后的CD34+細胞以300g離心5分鐘,，用1 mL完·全培養(yǎng)基重懸后計數(shù),。
• 根據(jù)計數(shù)結(jié)果，將細胞重懸至105 cells/mL的密度,，接種到T25培養(yǎng)瓶或細胞培養(yǎng)板中,。
• 3天后補液一次，若進行轉(zhuǎn)染實驗,，需調(diào)整細胞密度至2×105 cells/mL,，并隔天補液。

2.4 轉(zhuǎn)染操作

• 轉(zhuǎn)染核酸：mRNA,。
• 轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基：使用Opti-MEM培養(yǎng)基或無血清RPMI 1640/無血清DMEM培養(yǎng)基,。
• 轉(zhuǎn)染體系：配置ProteanFect Max轉(zhuǎn)染體系，具體protocol需參考私戳獲取,。
• 細胞準備：確保細胞活率超過90%,，避免反復離心。
• 轉(zhuǎn)染過程：孵育時間建議15分鐘,，適當延長可提高轉(zhuǎn)染率,，但可能影響細胞活力。
• 效率檢測：使用陽性對照mRNA,，轉(zhuǎn)染后5-48小時內(nèi)觀察EGFP表達,。細胞活率可通過鏡下觀察、臺盼藍,、AO/PI染色或流式細胞術檢測,。

3. 結(jié)果

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