利用Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量
- 公司名稱 富士膠片和光（廣州）貿(mào)易有限公司
- 品牌 Wako/和光純藥
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2020/10/12 16:00:23
- 訪問次數(shù) 1033
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| 供貨周期 | 一個(gè)月以上 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
利用Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量
檢測氨基酸飲料的氨基酸
和光純藥工業(yè)株式會(huì)社 試劑化學(xué)實(shí)驗(yàn)室 須藤 勇紀(jì)
◆前言
自從天冬酰胺在1806年從蘆筍汁中分離成功以來,，人們開始發(fā)現(xiàn)氨基酸,，并將其大致分為四類，即作為營養(yǎng)物質(zhì)的利用,，作為味道成分的利用，生理作用的利用,，反應(yīng)性的利用,，這些功能在我們生活中是*的 1）。另外,，在動(dòng)物體內(nèi)無法合成的氨基酸既是動(dòng)物的必需氨基酸,，也是很重要的食物營養(yǎng)素。
在日本實(shí)施的1991年特定保健食品體系、2002年保健功能食品體系,、2015年功能性食品體系過程中,，也是期待著將氨基酸作為保健品用于國民自我治療藥物的實(shí)踐中 2,3）。功能性標(biāo)示食品制度因其呈報(bào)制度更便于新企業(yè)參與,。2017年3月特定保健用食品的數(shù)量為1,127件,，功能性標(biāo)示食品從以往的815件正在急劇增加中。從而可預(yù)計(jì)保健食品市場將迅速擴(kuò)大,。氨基酸作為營養(yǎng)素的功能已被廣泛認(rèn)可,，以飲料，健康飲料,，果凍等多種形態(tài)的氨基酸的食品流通于市場中 1）,，未來也將繼續(xù)推出更多含有氨基酸的新型食品。
◆3-氨基吡啶-N-羥基琥珀酰亞胺基氨基甲酸酯（APDS）衍生化
高效液相色譜法（HPLC）中的氨基酸分析衍生化技術(shù)是很久以前便存在的,，因此市面上也存在許多種類的衍生劑,，其中包括茚三酮和鄰苯二甲醛。本次介紹的APDS氨基酸衍生化技術(shù)是一種具有高疏水性,，且因其高電離效率更有利于反相LC/MS（/MS）的方法,。
該方法不僅用于味之素株式會(huì)社的“Amino index® 癌癥風(fēng)險(xiǎn)篩選”（AICS）7）。在食品分析中也用于氨基酸分析裝備（UF-Amino Station）的分析案例 8）,。
Wakopak® Ultra APDSTAG® 是一種分析柱,，可利用LC / MS / MS儀器對(duì)APDS-氨基酸衍生物進(jìn)行分離分析。本次我們介紹的是使用該柱分析市售氨基酸飲料中的氨基酸種類,。
◆實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果分析
樣品前處理和衍生化的流程如圖1所示,，LC/MS/MS條件如表1所示。 定量采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行,。在這次實(shí)驗(yàn)的飲料中,，據(jù)材料記載氨基酸種類含有甘氨酸（Gly），丙氨酸（Ala）,，纈氨酸（Val）,，亮氨酸（Leu），異亮氨酸（Ile）和精氨酸（Arg）這六種種類,，但市售飲料中都不含表1的N0.13~20的氨基酸類,。圖2顯示的是市售飲料中的6種氨基酸的MRM色譜分析圖。接下來,，將氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品加入到獲得該色譜的樣品中,，并進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)。圖3顯示的是添加標(biāo)準(zhǔn)品后飲料的MRM色譜圖,，而圖4則是加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示圖,?；厥章矢哌_(dá)99-103％。
根據(jù)這次研究的結(jié)果顯示,，使用Wakopak® Ultra APDS TAG® 進(jìn)行APDS衍生化的氨基酸定量檢測是有效的,。雖然這次推出的結(jié)果僅限于飲料，但對(duì)于分析其他食品和培養(yǎng)液等樣品也是有用的,，歡迎采購此產(chǎn)品用于定量分析氨基酸,。
表１．LC/MS/MS條件
設(shè)備 | Prominence LC-20A XR（島津公司） |
柱 | Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1×100 mm（W） |
防護(hù)過濾器 | SunShell RP防護(hù)過濾器（Cromanic Technologies） |
流動(dòng)相A | APDS TAG® 洗脫液 |
流動(dòng)相B | 60％乙腈 |
梯度條件 | 0 min.（A：B=94：6）→0.05 min.（92：8） →1.70 min.（92：8） →1.71 min.（88：12）→4.95 min.（70：30）→5.95 min.（40：60）→5.96 min.（5：95）→6.70 min.（5：95） →6.71 min.（94：6）→12 min.（94：6） |
流量 | 0.3 mL/min. |
柱溫 | 40 ℃ |
注射量 | 1 μL |
設(shè)備 | LCMS-8030 Plus（島津公司） |
電離 | ESI positive |
測量模式 | MRM |
DL溫度 | 250 ℃ |
霧化器氣體流量 | 1.5 L/min. |
加熱塊溫度 | 250 ℃ |
干燥氣體流量 | 10 L/min. |
No. | 組件名稱（簡稱） | 分子量 | 監(jiān)測因子（m/z） | |
前體 | 制品 | |||
1 | 甘氨酸（Gly） | 75.1 | 196.1 | 121.0 |
2 | 甘氨酸-13C2，15N（Gly-IS） | 78.1 | 199.1 | 121.1 |
3 | 丙氨酸（Ala） | 89.1 | 210.1 | 121.0 |
4 | 丙氨酸-13C3（Ala-IS） | 92.1 | 213.1 | 121.1 |
5 | 纈氨酸（Val） | 117.2 | 238.1 | 121.0 |
6 | 纈氨酸-13C5, 15N（Val-IS） | 123.1 | 244.1 | 121.1 |
7 | 亮氨酸（Leu） | 131.2 | 252.1 | 121.0 |
8 | 異亮氨酸（Ile） | 131.2 | 252.1 | 121.0 |
9 | 亮氨酸-5,5,5-d3（Leu-IS） | 134.2 | 255.1 | 121.1 |
10 | 異亮氨酸-13C6,15N（Ile-IS） | 138.1 | 259.1 | 121.1 |
11 | 精氨酸（精氨酸） | 174.2 | 295.1 | 175.1 |
12 | 精氨酸-15N4（Arg-IS） | 178.2 | 299.1 | 179.1 |
13 | 肌氨酸（Sar） | 89.1 | 210.0 | 121.0 |
14 | 羥脯氨酸（Hypro） | 131.1 | 252.1 | 121.0 |
15 | 天冬酰胺（Asn） | 132.1 | 253.1 | 121.0 |
16 | 天冬氨酸（Asp） | 133.1 | 254.1 | 121.0 |
17 | 谷氨酰胺（Gln） | 146.1 | 267.1 | 121.0 |
18 | 谷氨酸（Glu） | 147.1 | 268.1 | 121.0 |
19 | α-氨基己二酸（α-AAA） | 161.2 | 282.1 | 121.0 |
20 | 瓜氨酸（Cit） | 175.2 | 296.3 | 121.0 |
圖2.市售飲料中6種氨基酸成分的MRM色譜圖
圖3.添加標(biāo)準(zhǔn)品后飲料的MRM色譜圖
圖4.加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示圖
<致謝>感謝味之素股份有限公司的每一位同仁對(duì)本產(chǎn)品的合作,。
Wako Pack® Ultra APDS Tag®通用LC/MS可以實(shí)現(xiàn)高靈敏度和高速氨基酸分析,。
◆產(chǎn)品列表
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
235-63973 | Ultra APDS TAG® 氨基酸分析柱 | 1支 |
◆相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 標(biāo)準(zhǔn)/制造商 | 規(guī)格 |
014-23841 | 氨基酸分析試劑（用于LC/MS） | 用于氨基酸自動(dòng)分析 | 100毫克 |
011-14463 | 氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液, AN-2型 | 用于氨基酸自動(dòng)分析 | 1毫升×5A 5毫升 |
015-14461 | |||
012-08643 | 氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液, B型 | 用于氨基酸自動(dòng)分析 | 1毫升×5A 5毫升 |
016-08641 | |||
019-08393 | 氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液, H型 | 用于氨基酸自動(dòng)分析 | 1毫升×5A 5毫升 |
013-08391 | |||
293-73701 | APDS TAG® Wako Amino Acids Internal Standard Mixture Solution | 用于氨基酸自動(dòng)分析 | 1套 |
010-23061 | APDS標(biāo)簽洗提液 | 用于氨基酸自動(dòng)分析 | 1升 |
019-23151 | APDS標(biāo)簽硼酸鹽緩沖液 | 用于氨基酸自動(dòng)分析 | 1升 |
380-04131 | SunShell RP Guard Filter Starter kit （a holder, a cartridge, a tubing） | Cromic技術(shù) | 1套 |
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