牛白介素5(IL5)檢測(cè)試劑盒
參考價(jià) | ¥ 1200 |
訂貨量 | ≥1 |
- 公司名稱 上海信裕生物科技有限公司
- 品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地 中國(guó)/美國(guó)/德國(guó)
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2018/1/20 22:53:32
- 訪問(wèn)次數(shù) 536
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Elisa試劑盒,試劑盒,,抗體,,細(xì)胞,血清,,生化試劑,,生物培養(yǎng)基,實(shí)驗(yàn)耗材等科研產(chǎn)品
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牛白介素5(IL5)檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟
1).水提取:稱取5kg用水沖刷干凈的鮮辣根(辣根皮中亦含有豐富的HRP),,用菜刀切成小碎塊,,在絞肉機(jī)中絞碎1~2次。碎渣漿用1倍體積的水低溫下攪拌提取(亦可采用高速抽提法),。次日用甩干機(jī)(或離心機(jī))甩干,,收集濾液,碎渣再用1/4倍體積水浸泡提取1次,,合并2次濾液,,測(cè)得總體積。
2).硫酸銨分級(jí)分離:在不斷攪拌下,,每1000mL濾液中慢慢加入226g硫酸銨粉末(相當(dāng)于0.40飽和度,,0℃),大約在1~2h內(nèi)加完,,置冷室中放置,。次日將上清液小心地用虹吸管移出,下面混濁液以3 000r/min離心15min,,棄沉淀,,合并上清液。再按每1000mL上清液加258g硫酸銨粉末(0.8飽和度)隨加隨攪拌,,當(dāng)硫酸銨全部溶解后,,置冷室。次日,,虹吸出上清液,,沉淀部分在冰凍離心機(jī)中以13000r/min離心20min,棄去上清液,,收集沉淀,。將沉淀懸浮于100~150mL蒸餾水中(加水量要使沉淀全部溶解為止),分裝于透析袋內(nèi),,放在流動(dòng)自來(lái)水中進(jìn)行透析1~2天,,直到硫酸銨透析完畢為止(可用5%乙酸鋇溶液或奈氏試劑進(jìn)行檢查)。然后改換成用蒸餾水透析,,中間更換2~3次,,用0.1mol/L溶液檢查透析外液無(wú)氯離子為止,。將透析液合并,在冰凍離心機(jī)中以4 000r/min離心15min,,棄去沉淀,,量上清液的體積。
3).丙酮分級(jí)分離:將上清液倒入燒杯并置冰鹽浴中,,在不斷攪拌下,,用細(xì)滴管沿杯壁加入1倍體積預(yù)冷至-15℃的丙酮,放置片刻,,在冰凍離心機(jī)中以4000r/min離心15min,,棄去沉淀。上清液再加入0.8體積(按原上清液體積)-15℃丙酮,,(操作同上),,靜置后,在冰凍離心機(jī)中離心收集沉淀,。將沉淀溶于少量蒸餾水中,,透析除去丙酮??傻肦Z值近于1的酶溶液,。
4).精制:將上步酶液適當(dāng)稀釋,滴加1mol/L硫酸鋅溶液,,使酶液中鋅離子濃度為10 -3 mol/L,,5 000r/min離心10min,得上清液,。再將沉淀用少量蒸餾水洗滌,,離心,洗液與清液合并,,分裝于透析袋內(nèi),,用水透析除鹽,用微孔濾膜過(guò)濾,,進(jìn)行真空冰凍干燥(約得20mg),,產(chǎn)品呈米黃色纖維狀松軟物,HRP產(chǎn)品的RZ值可達(dá)3.0左右,,置真空干燥器中低溫保存,。
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