多肽溶解方法
- 公司名稱 武漢明皓生物科技股份有限公司
- 品牌
- 型號
- 產地
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2017/5/7 13:31:28
- 訪問次數(shù) 732
聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網上看到的信息,,謝謝!
以我們的經驗,,溶解肽是一個很重要的環(huán)節(jié)。如果溶解不當可能導致肽損失或者實驗失敗,。肽的溶解性主要取決于肽的序列,,所以,如果實驗允許,,肽序列中至少應包含20%的帶電殘基以增加其溶解度,。
在使用之前,客戶可以遵循以下三個基本原則來選擇合適的溶劑溶解多肽,。首先,,所選溶劑一定能充分溶解多肽;其次,,所選溶劑能與實驗條件兼容,;zui后,所選溶劑不能與肽反應,,也不能使肽降解,。只要肽的量允許,可以先用少部分肽溶解,,然后再將全部樣品溶解,。如果需要從溶劑中回收肽,可以選擇一種初始溶劑使其在凍干后容易去除,。
以下建議或許對您溶解肽有所幫助:
1. 少于5個氨基酸的肽一般溶于水溶液,,強疏水的氨基酸(W,I,,L,,F(xiàn),M,,V,,Y)除外。
2. 如果帶電氨基酸平均分布于全部序列中,,那么含有>25%帶電氨基酸(E,,D,K,,R,,H)的親水肽和含有<25%疏水氨基酸的肽一般都能溶于水溶液。多肽的純化系統(tǒng)一般為0.1%TFA/水和0.1%TFA/ ACN,。因此,,如果肽溶解在沒有緩沖能力或者緩沖能力很弱的緩沖液中,結果可能導致肽溶液呈酸性。在使用別的方法溶解肽時務必使溶劑的pH值近乎中性,。酸性肽(E+D殘基數(shù)多于K+R+H殘基數(shù))和堿性肽(K+R+H殘基數(shù)多于E+D殘基數(shù))在中性pH值條件下比在酸性pH值下更易于溶解,。
3. 對于疏水氨基酸含量為50%~75%的肽,即使序列中含有>25%帶電氨基酸也有可能不溶于水或者部分溶解,。先把肽溶于zui少量的強有機溶劑如DMF,、ACN、異丙醇,、乙醇,、乙酸、4-8M GdnHCl,、尿素,,或者DMSO(序列中沒有C,W,,M時),,及其它類似的有機溶劑中。將溶解肽的有機溶劑緩慢地逐滴加入水溶液中,,如果溶液變渾濁,,可能是達到了溶解極限,繼續(xù)溶解就沒什么用了,。需要注意的是,,zui開始選擇的溶劑應該與實驗系統(tǒng)兼容。
4. 疏水氨基酸含量>75%的強疏水肽一般也不溶于水溶液,。此類肽也應該先用強有機溶劑(如TFA,,甲酸)溶解,如果將其加入到水溶液中也可能產生沉淀,。zui后的肽溶液可能需要高濃度的有機溶劑使之變性,,而有機溶劑一般不用于活細胞的生物功能研究。
5. S,,T,,E,D,,K,,R,H,,N,,Q,Y含量高(>75%)的多肽序列容易形成多余的分子間氫鍵網絡,,在濃的水溶液中容易形成凝膠,。此類肽可以用步驟3所述方法溶解,。為了減少溶解中可能出現(xiàn)的問題,建議客戶從設計上和序列上多加考慮,,以改善肽的溶解度。
歡迎來訂購多肽
:
號: 2969854522
:
:
電子郵件:[email protected]
公司: http://www.moonbiochem.com