人β-淀粉樣蛋白1-42(圖1)是阿爾茨海默癥(AD)患者大腦沉積斑塊的主要成分,。AD病理學(xué),、診斷工具和潛在藥物的日常研究需要不間斷地供應(yīng)β-淀粉樣蛋白,。但據(jù)報(bào)道,,由于C末端的高疏水性,,以及序列預(yù)沉積導(dǎo)致的樹脂上聚集,,β-淀粉樣蛋白(1-42)難以通過傳統(tǒng)的固相多肽合成(SPPS)制備,。β-淀粉樣蛋白自動(dòng)合成的最新進(jìn)展包括紅外加熱和新的偶聯(lián)試劑組合,,能以更短的循環(huán)時(shí)間更好地合成疑難疏水肽。本文在Symphony® X 24通道多肽合成儀平行上探索了不同合成方法下β-淀粉樣蛋白的合成效率,。
使用Rink Amide ChemMatrix™ (0.47 mmol/g)和R TentaGel™樹脂(0.19 mmol/g),、PurePep™試劑:HDMA/OxymaPure™或HDMC/OxymaPure和DIPEA和預(yù)裝Fmoc氨基酸(1:1:1:2),在Symphony® X合成儀上,,按10倍過量,、規(guī)模50 µmol的條件合成多肽。測試了兩種合成方法:
方法A:脫保護(hù)2 x 3 min,,偶聯(lián)2 x 5 min,,25°C。
方法B:脫保護(hù)2 x 30 s,,90°C ,,偶聯(lián)2 x 1 min,,90°C,紅外加熱,。

Symphony X多肽合成儀功能靈活,,可同時(shí)測試5種獨(dú)立的β-淀粉樣蛋白合成條件,。HDMA(表1)和HDMC(表2)各與OxymaPure試劑組合,,使用Rink ChemMatrix或R TentaGel樹脂,按較慢的方法A合成β-淀粉樣蛋白,,所得粗品的純度相近,。最高純度來自HDMA/OxymaPure試劑和Rink Amide ChemMatrix樹脂的搭配(圖2)。
升高溫度(90°C)和加快反應(yīng)(方法B)后,,HDMA/OxymaPure/DIPEA試劑與Rink Amide ChemMatrix樹脂搭配的粗品純度為33.9%,。加快方法+高溫+HDMA搭配的合成純度與慢方法(表1)的相近。
表1.使用HDMA/OxymaPure/DIPEA試劑按方法A合成β-淀粉樣蛋白,,所得粗品純度和產(chǎn)率,。

表2.使用HDMC/OxymaPure/DIPEA試劑按方法A合成β-淀粉樣蛋白,所得粗品純度和產(chǎn)率,。
12 - ?-淀粉樣蛋白 – 4.940
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1
使用Symphony X多肽合成儀,,可在24h(常溫)或17h(90℃)內(nèi)同時(shí)評(píng)測24種合成條件,并且在儀器上完成自動(dòng)肽鏈切割
2
評(píng)測了6種不同合成條件(溫度,、樹脂和偶聯(lián)試劑組合),,初步確定了疏水肽純度和產(chǎn)率的最佳合成條件
3
使用新型多肽試劑HDMA,通過快速方法和紅外加熱(90°C),,在Symphony X多肽合成儀上成功地合成了β-淀粉樣蛋白(1-42)-NH2
4
在此基礎(chǔ)上可對(duì)疏水長鏈肽(如β-淀粉樣蛋白)合成的進(jìn)一步優(yōu)化,,包括縮短偶聯(lián)時(shí)間、改用新的偶聯(lián)試劑組合
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