96T 呋喃代謝物檢測(cè)試劑盒介紹（四合一）
| 參考價(jià) | ￥ 3600 |
| 訂貨量 | ≥1 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海卡努ELISA試劑有限公司
- 品牌
- 型號(hào) 96T
- 產(chǎn)地 進(jìn)口
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時(shí)間 2013/5/28 14:52:44
- 訪問次數(shù) 195
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ELISA試劑盒,、免疫組化試劑盒、分子生物學(xué)試劑盒,、細(xì)胞凋亡試劑盒,。 細(xì)胞：美國(guó)原裝進(jìn)口原代細(xì)胞,細(xì)胞系 ,細(xì)胞株,專業(yè)培養(yǎng)基，常用傳統(tǒng)培養(yǎng)基,， 耗材：細(xì)胞培養(yǎng)耗材,、普通實(shí)驗(yàn)耗材,。 生化試劑：原裝進(jìn)口生化試劑、進(jìn)口分裝生化試劑,、國(guó)產(chǎn)生化試劑,。抗體：進(jìn)口原裝抗體,、進(jìn)口分裝抗體,、單克隆抗體、多克隆抗體,、一抗,、二抗
呋喃代謝物檢測(cè)試劑盒介紹
（四合一）
1 原理及用途
本套試劑盒有四種產(chǎn)品，采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)組織,、蜂蜜,、牛奶等樣本中的呋喃類代謝物（AOZ、AMOZ,、SEM,、AHD），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板,、辣根酶標(biāo)記物,、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成,。檢測(cè)時(shí),，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的呋喃代謝物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗呋喃代謝物抗體,，加入酶標(biāo)記物后,，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含呋喃代謝物含量成負(fù)相關(guān),，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中呋喃代謝物的殘留量,。
2 技術(shù)指標(biāo)
四種產(chǎn)品
加樣模式統(tǒng)一：50ul樣本/孔+50ul酶/孔+50ul抗體/孔。
反應(yīng)模式統(tǒng)一：25℃,，45min～15min,；（具體見“6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟”）
前處理方法統(tǒng)一：即處理的一個(gè)樣本可分別用于檢測(cè)四種代謝物。做添加回收時(shí)也可以將四種高標(biāo)準(zhǔn)加入同一個(gè)樣本中,，一次性處理后分別用于檢測(cè)四種代謝物,。（具體見“5 樣本前處理”）
2.1 試劑盒靈敏度及檢測(cè)下限
呋喃唑酮代謝物檢測(cè)試劑盒：0.02ppb（ng/ml）
組織、肝臟…………………………0.04ppb
蜂蜜,、牛奶,、腸衣…………………0.04ppb
魚/蝦等水產(chǎn)品組織因有一定干擾，定量下限為0.1ppb
呋喃它酮代謝物檢測(cè)試劑盒：0.05ppb（ng/ml）
組織、肝臟…………………………0.1ppb
蜂蜜,、牛奶,、腸衣…………………0.1ppb
魚/蝦等水產(chǎn)品組織因有一定干擾，定量下限為0.15ppb
呋喃西林代謝物檢測(cè)試劑盒：0.05ppb（ng/ml）
組織,、肝臟…………………………0.1ppb
蜂蜜,、牛奶、腸衣…………………0.1ppb
魚/蝦等水產(chǎn)品組織因有一定干擾,，定量下限為0.15ppb
呋喃妥因代謝物檢測(cè)試劑盒：0.05ppb（ng/ml）
組織,、肝臟…………………………0.1ppb
蜂蜜、牛奶,、腸衣…………………0.1ppb
魚/蝦等水產(chǎn)品組織因有一定干擾,，定量下限為0.15ppb
3 試劑盒組成
四種產(chǎn)品的“衍生化試劑、底物液A,、底物液B,、終止液、20X濃縮洗滌液,、2X復(fù)溶液”成分統(tǒng)一,，可以通用。
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器：酶標(biāo)儀,、打印機(jī),、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置,、振蕩器,、離心機(jī)、刻度移液管,、天平（感量0.01g）
4.2 微量移液器：?jiǎn)蔚?0µl-200µl,，100µl-1000µl、多道300µl
4.3 試劑：乙酸乙酯,、正己烷,、鈉、濃HCl,、K2HPO4·3H2O,、亞硝基鐵（K2Fe（CN）5（NO）?2H2O）、ZnSO4·7H2O
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知：
實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭,。實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必須使用潔凈實(shí)驗(yàn)器具,，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.2 配液：
配液1：0.36M亞硝基鐵溶液（牛奶、奶粉樣本）
11.9g亞硝基鐵加去離子水至100ml溶解,。
配液2：1.04M硫酸鋅溶液（牛奶,、奶粉樣本）
29.8g硫酸鋅加去離子水至100ml溶解。
配液3：0.1M K2HPO4 溶液
稱11.4g K2HPO4?3H2O加去離子水溶解定溶至500ml,。
配液4：1M HCL
8.6mL濃HCL加去離子水定容至100mL,。
配液5：1M NaOH溶液
稱取4g NaOH，加去離子水定容至100ml,。
配液6：復(fù)溶液
2×復(fù)溶液在使用前請(qǐng)按1:1稀釋,。
5.3 樣本前處理步驟：
5.3.1 牛奶樣本處理方法
1）取5ml樣本于離心管中，加250ul 亞硝基鐵溶液（配液1）振蕩混合30秒,，加250ul 硫酸鋅溶液（配液2）振蕩混合30秒,，15℃4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；
2）取上清1.1ml,，加4ml去離子水,、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑，振蕩5分鐘,；
3）在37℃過夜孵育（約16小時(shí)）或50℃（超過50℃時(shí)會(huì)影響分層效果）水浴孵育3小時(shí),；
4）分別加入5ml 0.1M K2HPO4 溶液，0.4ml 1M NaOH溶液和5ml的乙酸乙酯,，振蕩5分鐘,；
5）室溫下4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘,；
6）取出2.5ml的上層液到另一個(gè)離心管中,，50-60℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/span>
7）用1ml正已烷溶解殘留物，加入1ml復(fù)溶工作液充分振蕩混合30秒,；室溫4000轉(zhuǎn)/分,，離心10分鐘；
8）去除上層正已烷,，取50μl下層液用于分析,。
樣本稀釋倍數(shù)為2
5.3.2 蜂蜜、組織,、腸衣,、肝臟樣本處理方法
1）稱取1±0.05g均質(zhì)樣于離心管中，加入4ml去離子水,、0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑,，振蕩5分鐘；
2）后續(xù)接“5.3.1 牛奶樣本處理方法,，3）”
5.3.3 熟食樣本處理方法
1）稱取1±0.05g均質(zhì)樣于50ml離心管中,，加入4.5ml甲醇和0.5ml去離子水,，振蕩2min，室溫4000轉(zhuǎn)/分,，離心5分鐘,，去除全部液體；
2）加入5ml乙氰和5ml正己烷,，振蕩2min,，室溫4000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘,，去除全部液體,；
3）加0.5 ml 1M 鹽酸溶液和100μl衍生化試劑，振蕩5分鐘,；
注：熟食的添加回收試驗(yàn)請(qǐng)?jiān)诖瞬郊尤敫邩?biāo)準(zhǔn),。
4）后續(xù)接“5.3.1 牛奶樣本處理方法，3）”
6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,，將不用的微孔板放入自封袋,，保存于2-8℃。
實(shí)驗(yàn)開始前需：將20×濃縮洗滌液用去離子水按1:19稀釋成工作洗滌液,。
6.1 編 號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置,。
6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,，然后加酶標(biāo)記物50µl/孔，再加抗體工作液50µl/孔,，用蓋板膜封板,，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應(yīng)45分鐘,。
6.3 洗 滌：小心揭開蓋板膜,，將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,，每次間隔30秒,，用吸水紙拍干。
6.6 顯 色：每孔加入底物液A 50µl,，再加底物液B 50µl,，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘,。
6.7終 止：每孔加入終止液50µl,，輕輕振蕩混勻,，終止反應(yīng)。
6.8測(cè)吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm）,。測(cè)定應(yīng)終止反應(yīng)后在10分鐘內(nèi)完成,。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0ppb）的吸光度值，再乘以*,，即
| 百分吸光度值（%）＝ | A | ×* |
| A0 |
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
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