Hoechst 33342 *超級(jí)純*

產(chǎn)品描述

Hoechst 33342是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,，對(duì)細(xì)胞的毒性較低,，在嵌入雙鏈DNA后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光,。Hoechst 系列染料因與DNA結(jié)合的特性,，也常被用來(lái)進(jìn)行線(xiàn)粒體DNA的觀察。

Hoechst33258和Hoechst33342是兩種非常相近的Hoechst染料,，他們都在紫外段350 nm被激發(fā),，發(fā)射波長(zhǎng)都為461 nm，兩種染料經(jīng)常被用來(lái)替代另一種熒光染料DAPI. Hoechst 33342比33258具有更強(qiáng)的親脂性,，因此能更好的透過(guò)完整的細(xì)胞膜,，在部分實(shí)驗(yàn)中Hoechst33258的細(xì)胞透過(guò)性存在明顯不足。用于細(xì)胞核染色時(shí),，推薦的Hoechst 33342工作終濃度為0.5～5 μM,，在一些敏感性實(shí)驗(yàn)時(shí)，建議設(shè)置多個(gè)染色濃度,，以獲得需要的染色效果,。

訂購(gòu)信息

技術(shù)參數(shù)

　　光學(xué)性質(zhì)：Ex(nm)：350      Em(nm)：461

　　化學(xué)參數(shù)：分子量：561.93  溶劑：Water        CAS：23491-52-3

保存方法

　　冰袋（wet ice）運(yùn)輸，-20℃干燥避光保存,，保質(zhì)期12個(gè)月,。

使用方法

1. 緩沖液制備。用PBS或合適的緩沖液制備10～50 μM Hoechst 33342染色液,。李記生物也提供配制好的20 mM Hoechst 33342（CAT:AC12L021）產(chǎn)品,，既方便存放，以方便稀釋備用,。

2. 固定的細(xì)胞或組織染色,。對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后,，適當(dāng)洗滌去除固定劑,。依次按步驟進(jìn)行免疫熒光染色，和Hoechst33342染色,。如果不進(jìn)行免疫熒光染色,，則直接按步驟進(jìn)行Hoechst33342染色。

（1）對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量Hoechst 33342染色液,，覆蓋住樣品即可,。對(duì)于懸浮細(xì)胞：至少加入待測(cè)染色樣品體積3倍的染色液，混勻,。室溫放置3~5 min,。

（2）吸除Hoechst 33342染色液,，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2~3次,，每次3~5 min,。

（3）直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)350 nm,，發(fā)射波長(zhǎng)461 nm,。

3. 活細(xì)胞或組織染色

（1）細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33342染色液，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積,，必須充分覆蓋住待染色的樣品,。通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1 mL染色液，對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100 μL染色液,。

（2）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10～20 min,。

（3）用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。

（4）直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察,。激發(fā)波長(zhǎng)350 nm,，發(fā)射波長(zhǎng)461 nm。

注意事項(xiàng)

1. Hoechst 33342溶于水,，溶解度可達(dá)20mM(約10mg/ml),。您也可直接購(gòu)買(mǎi)20 mM的液體規(guī)格產(chǎn)品（貨號(hào):AC12L021）。

2. Hoechst 33342對(duì)人體有一定刺激性,，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù),。

3. 熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè),。

4. 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液,。