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藥品質(zhì)量檢測(cè)方法:熒光分光光度法
2022年08月24日 10:35:53 來(lái)源:化工儀器網(wǎng) 點(diǎn)擊量:6623

熒光分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的熒光譜線位置及其強(qiáng)度進(jìn)行物質(zhì)鑒定和含量測(cè)定的方法,。

  【化工儀器網(wǎng) 行業(yè)百態(tài)】熒光是指物質(zhì)分子在激發(fā)態(tài)最低振動(dòng)能級(jí)返回到基態(tài)各振動(dòng)能級(jí)時(shí)所發(fā)出來(lái)的光,比激發(fā)光波長(zhǎng)更長(zhǎng),。熒光分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的熒光譜線位置及其強(qiáng)度進(jìn)行物質(zhì)鑒定和含量測(cè)定的方法,。當(dāng)激發(fā)光強(qiáng)度、波長(zhǎng),、所用溶劑和溫度等條件固定時(shí),,物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi),其發(fā)射光強(qiáng)度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比關(guān)系,,可以用于該物質(zhì)的含量測(cè)定,。
 
  由于不同的物質(zhì)其組成與結(jié)構(gòu)不同,所吸收的紫外-可見(jiàn)光波長(zhǎng)和發(fā)射光的波長(zhǎng)也不同,,同一種物質(zhì)應(yīng)具有相同的激發(fā)光譜和熒光光譜,,將未知物的激發(fā)光譜和熒光光譜圖的形狀、位置與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的光譜圖進(jìn)行比較,,即可對(duì)其進(jìn)行定性分析,。如果該物質(zhì)的濃度不同,它所發(fā)射的熒光強(qiáng)度就不同,,測(cè)量物質(zhì)的熒光強(qiáng)度可對(duì)其進(jìn)行定量測(cè)定,。
 
  熒光分光光度法的特點(diǎn)是靈敏度高、選擇性好,、樣品用量少和操作簡(jiǎn)便,,常用于微量甚至痕量毒物的定量分析。其靈敏度一般較紫外-可見(jiàn)分光光度法高,,但濃度太高的溶液會(huì)發(fā)生“自熄滅”現(xiàn)象,,而且在液面附近溶液會(huì)吸收激發(fā)光,使發(fā)射光強(qiáng)度下降,,導(dǎo)致發(fā)射光強(qiáng)度與濃度不成正比,,故熒光分光光度法應(yīng)在低濃度溶液中進(jìn)行。在衛(wèi)生檢驗(yàn),、環(huán)境及食品分析,、藥物分析、生化和臨床檢測(cè)等方面有著廣泛的應(yīng)用,。
 
  測(cè)定法
 
  熒光分光光度法所用的儀器為熒光計(jì)或熒光分光光度計(jì),,按各品種項(xiàng)下的規(guī)定,選定激發(fā)光波長(zhǎng)和發(fā)射光波長(zhǎng),,并制備對(duì)照品溶液和供試品溶液,。
 
  通常熒光分光光度法是在一定條件下,測(cè)定對(duì)照品溶液熒光強(qiáng)度與其濃度的線性關(guān)系,。當(dāng)線性關(guān)系良好時(shí),,可在每次測(cè)定前,,用一定濃度的對(duì)照品溶液校正儀器的靈敏度。然后在相同的條件下,,分別讀取對(duì)照品溶液及其試劑空白的熒光強(qiáng)度與供試品溶液及其試劑空白的熒光強(qiáng)度,,并用下式計(jì)算供試品濃度:
 
  式中,Cx為供試品溶液的濃度,,Cr為對(duì)照品溶液的濃度,,Rx為供試品溶液的熒光強(qiáng)度,Rxb為供試品溶液試劑空白的熒光強(qiáng)度,,Rr為對(duì)照品溶液的熒光強(qiáng)度,,Rrb為對(duì)照品溶液試劑空白的熒光強(qiáng)度。
 
  且因熒光分光光度法中的濃度與熒光強(qiáng)度的線性范圍較窄,,故(Rx-Rxb)/(Rr-Rrb)應(yīng)控制在0.5~2之間為宜,,如若超過(guò),應(yīng)在調(diào)節(jié)溶液濃度后再進(jìn)行測(cè)定,。需要注意的是,,當(dāng)濃度與熒光強(qiáng)度的關(guān)系明顯偏離線性范圍時(shí),應(yīng)改用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行含量測(cè)定,。
 
  對(duì)易被光分解或弛豫時(shí)間較長(zhǎng)的品種,,為使儀器靈敏度定標(biāo)準(zhǔn)確,避免因激發(fā)光多次照射而影響熒光強(qiáng)度,,可選擇一種激發(fā)光和發(fā)射光波長(zhǎng)與供試品近似而對(duì)光穩(wěn)定的物質(zhì)配成適當(dāng)濃度的溶液,,作為基準(zhǔn)溶液。例如藍(lán)色熒光可用硫酸奎寧的稀硫酸溶液,,黃綠色熒光可用熒光素鈉水溶液,,紅色熒光可用羅丹明B水溶液等。在測(cè)定供試品溶液時(shí)選擇適當(dāng)?shù)幕鶞?zhǔn)溶液代替對(duì)照品溶液校正儀器的靈敏度,。
 
  【附注】
 
  熒光分光光度法因靈敏度高,故應(yīng)注意以下干擾因素,。
 
  (1)溶劑不純會(huì)帶入較大誤差,,應(yīng)先做空白檢查,必要時(shí),,應(yīng)用玻璃磨口蒸餾器蒸餾后再用,。
 
  (2)溶液中的懸浮物對(duì)光有散射作用,必要時(shí),,應(yīng)用垂熔玻璃濾器濾過(guò)或用離心法除去,。
 
  (3)所用的玻璃儀器與測(cè)定池等也必須保持高度潔凈。
 
  (4)溫度對(duì)熒光強(qiáng)度有較大的影響,,測(cè)定時(shí)應(yīng)控制溫度一致,。
 
  (5)溶液中的溶氧有降低熒光作用,,必要時(shí)可在測(cè)定前通入惰性氣體除氧。
 
  測(cè)定時(shí)需注意溶液的pH值和試劑的純度等對(duì)熒光強(qiáng)度的影響,。
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