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Store at：RT 試劑盒規(guī)格：3×100ml/Kit
試劑盒內容：
全血及組織稀釋液 100ml
細胞洗滌液 100ml
試劑C 100ml
試劑E 100ml
試劑F 100ml
說明書 1 份

1. 適用于各種動物脾臟組織本系列產品檢索：
貨號                          名稱                                       規(guī)格          價格
LDS1080PK 大鼠脾臟單個核細胞分離液試劑盒 3×100ml/kit 600.00
LDS1090PK 小鼠脾臟單個核細胞分離液試劑盒 3×100ml/kit 600.00
LDS1083PK 豚鼠脾臟單個核細胞分離液試劑盒 3×100ml/kit 600.00
LDS1088CPK 雞脾臟單個核細胞分離液試劑盒 3×100ml/kit 600.00
LDS1088DPK 鴨脾臟單個核細胞分離液試劑盒 3×100ml/kit 800.00
LDS1088GPK 鵝脾臟單個核細胞分離液試劑盒 3×100ml/kit 800.00
LDS1077PK 狗脾臟單個核細胞分離液試劑盒 3×100ml/kit 600.00

LDS1108PK 豬脾臟單個核細胞分離液試劑盒 3×100ml/kit 600.00
LDS1084PK 牛脾臟單個核細胞分離液試劑盒 3×100ml/kit 600.00
LDS1084YPK 羊脾臟單個核細胞分離液試劑盒 3×100ml/kit 600.00
LDS1091PK 馬脾臟單個核細胞分離液試劑盒 3×100ml/kit 600.00
LDS1076PK 猴脾臟單個核細胞分離液試劑盒 3×100ml/kit 600.00
LDS1094PK 兔脾臟單個核細胞分離液試劑盒 3×100ml/kit 600.00
LDS1079FPK 魚脾臟單個核細胞分離液試劑盒 3×100ml/kit 600.00

3. 注意事項
A． 本分離液是敏光型的,，在運輸和貯藏過程中應在18℃-25℃避光保存，啟封后置4℃保存避免微生物污染,。另外,，本品為真空包裝，未啟封前置于10℃ 以下易出現(xiàn)白色結晶,，影響分離效果,。
B． 待分離的樣本要求新鮮,，避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時分離效果,，且所有操作過程一定要在無菌條件下進行,。
C． 由于各品牌離心機的性能不同，國內南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,，可能影響分離效果，用戶可以調節(jié)離心轉數(shù),，調節(jié)離心的時間,，摸索*的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）。
D． 使用無靜電反應的離心管,，推薦使用未經過堿處理的玻璃離心管,。
E． 分離過程中所用其他試劑如：羥yi基淀粉550、全血及組織稀釋液,、細胞洗滌液及紅細胞裂解液等以我公司產品為*選擇,，本公司相關系列產品無菌、無病毒,、無支原體,、低內毒素水平且無細胞毒性，所獲得的細胞可保持完好的生物活性和完整的細胞形態(tài),。

4. 應 用
適用于從各種動物脾臟組織中分離單個核細胞,。

5. 產品性能指標
pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內毒素 ≤0.5EU/ml

無菌 直接接種培養(yǎng)14 天后培養(yǎng)基澄清澄明度及不溶性顆粒物 每50ml溶液中含10μm以上的不溶性微粒20粒以下，含25μm以上的不溶性微粒5粒以下

6. 貯藏及保存期限
18℃-25℃避光保存,，有效期兩年,。啟封后置4℃保存，有效期一周,。
注：若保證無微生物污染,，啟封后可置4℃長期保存。但應注意保存溫度較低時本分離液易出現(xiàn)白色結晶,，影響分離效果,。

7. 實驗前準備

A． 試劑
脾臟單個核細胞分離液試劑盒所含試劑、胎牛血清
B． 器材
玻璃離心管,、玻璃滴管水平轉子離心機,、無菌工作臺

8.脾臟組織單個核細胞分離液使用方法說明及圖例
A. 取 1ml 脾臟細胞懸液（細胞濃度為2×108-1×109個/ml，制備方法詳見“9. 脾臟組織單細胞懸液的制備方法”）與E 液 按1：1 比例混合再與1 份全血及組織稀釋液混勻置20℃-30℃下自然沉降20-30 分鐘,。吸取渾濁的上清部分,，棄去底部紅細胞備用。

B. 吸取渾濁的上清部分液體小心疊加在C 液之液面上（比例為1：1）,，20℃±2℃,，400g（約1500 轉/分）,，離心20 分鐘（半徑15cm 水平轉子）。

此時離心管中由上至下細胞分四層,。*層;為稀釋液層,。第二層；為環(huán)狀乳白色單個核細胞層,。第三層,；為透明分離液層。第四層,；為極少紅細胞層,。收集第二層細胞放入含細胞洗滌液4-5 毫升的試管中，充分混勻后,，以500g（約1800 轉/分）離心20 分鐘,。沉淀經反
復洗滌2 次即得所需單個核細胞。
注： 提取率約為80%,。

9. 脾臟組織單細胞懸液的制備
注：

A. 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境,。
B．本試劑盒中不包含膠原酶，若采用酶消化法制備單細胞懸液,，請用戶根據各實驗室要求另購不同類型膠原酶,。
Ⅰ. 剪碎法：將組織塊放入平皿后，加入少量 F液及 20%胎牛血清,；用眼科剪將組織剪至勻漿狀,，加入5mlF 液及20%胎牛血清；用吸管吸取組織勻漿,，用100 目不銹鋼濾網（另購）過濾到試管內,；離心沉淀1500 轉/分×3 min，再用細胞洗滌液清洗3 次,，每次以500rpm 短時低速離心除去細胞碎片,，以200 目不銹鋼濾網（另購）過濾去細胞團塊。作細胞計數(shù)并調整細胞濃度為（2～5）×107個/ml,。常溫下放置, 待測細胞的活力,。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為2×108-1×109個/ml 的單細胞懸液備用。

Ⅱ. 勻漿器法：用眼科剪將組織剪成小塊,；放入 70ml 組織研磨器內,，加入2mlF 液及20%胎牛血清；緩慢轉動研棒,，研磨至勻漿,；用5mlF 液及20%胎牛血清沖洗研器；收集細胞懸液,，經200 目不銹鋼濾網（另購）過濾,；離心沉淀800rpm×2min ,，再用細胞洗滌液洗3 次，離心沉淀,。作細胞計數(shù)并調整細胞濃度為（2～5）×107個/ml,。常溫下放置, 待測細胞的活力。

分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為2×108-1×109個/ml 的單細胞懸液備用,。

Ⅲ. 酶消化法：
A． 用F 液將膠原酶稀釋,，終濃度為400 U/ml，至于冰浴備用,。
B． 取一適當大小培養(yǎng)皿進行操作：用鑷子夾碎動物脾臟,，加入稀釋后的膠原酶，37℃消化20 分鐘,。
C． 以100 或200 目不銹鋼濾網（另購）過濾,，離心沉淀800prm×2min ,，再用細胞洗滌液洗3 次,，離心沉淀。作細胞計數(shù)并調整細胞濃度為（2～5）×107個/ml,。常溫下放置, 待測細胞的活力,。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為2×108-1×109個/ml 的單細胞懸液備用。

細胞計數(shù)方法:

細胞計數(shù)法是用來計數(shù)細胞懸液中細胞數(shù)量的一種方法,。一般利用計數(shù)板（血球計數(shù)板）進行,。既可用于分離（散）細胞培養(yǎng)接種前計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，也可用于對培養(yǎng)物的細胞數(shù)量進行計數(shù),。不論計數(shù)的對象如何,，均須制備分散的細胞懸液。
計數(shù)與計算過程
1）,、在細胞計數(shù)板*放置計數(shù)的蓋玻片,。
2）、用玻璃虹吸管吸取細胞,，讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數(shù)板凹蹧處流出懸液,，至蓋玻片被液體充滿為止。
3）,、置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內的細胞總數(shù),。對于壓線的細胞只計數(shù)在上線和左線者，對于細胞團按單個細胞計數(shù),。
4）,、按下式計數(shù)細胞懸液的密度：
細胞密度＝（4 個大格細胞總數(shù)/4）×104個/ml×稀釋倍數(shù)
公式中乘以104
因為計數(shù)板中每一個大格的體積為：

1.0mm（長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm3
而 1ml＝1000mm3

細胞計數(shù)要點：

A． 進行細胞計數(shù)時，要求懸液中細胞數(shù)目不低于104個/ml,，如果細胞數(shù)目很少要進行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中,；顯微鏡下計數(shù)時,，遇到2 個以上細胞組成的細胞團，應按單個細胞計算,。如果細胞團>10％,，說明細胞分散不充分; 或細胞數(shù)<200 個/10mm2
或>500 個/10 mm2時，說明稀釋不當,，需重新制備細胞懸液,。
B． 要求細胞懸液中的細胞分散良好，否則影響計數(shù)準確性,。
C． 取樣計數(shù)前,，應充分混勻細胞懸液，尤其是多次取樣計數(shù)時更要注意每次取樣都要混勻,，以求計數(shù)準確,；
D． 數(shù)細胞的原則是只數(shù)完整的細胞，若細胞聚集成團時,，只按照一個細胞計算,。如果細胞壓在格線上時，則只計上線,，不計下線,，只計左線，不計右線,。
E． 操作時,，注意蓋玻片下不能有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中,，否則要重新計數(shù),。

初學者易犯的錯誤：
A． 計數(shù)前未將待測懸液吹打均勻。

B． 滴入細胞懸液時蓋玻片下出現(xiàn)氣泡,。
C． 滴入懸液時的量太多,，至使細胞懸液流入旁邊的槽中。