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大鼠組織因子途徑抑制物（TFPI）elisa試劑盒使用說明書

Elisa kit規(guī)格：48孔配置/96孔配置

標準品稀釋液：1.5ml×1瓶

酶標試劑：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96）

【大鼠組織因子途徑抑制物（TFPI）elisa試劑盒】本試劑僅供研究使用

計算：

以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。

試劑盒組成：

封板膜:2片（48）/2片（96）   

說明書:1份          

密封袋:1個

標準品：   2700ng/L  0.5ml×1瓶   0.5ml×1瓶  2-8℃保存            

酶標包被板:  1×48        1×96             2-8℃保存

樣品稀釋液: 3ml×1瓶       6 ml×1瓶         2-8℃保存

顯色劑A液: 3ml×1瓶       6 ml×1瓶         2-8℃保存

顯色劑B液: 3ml×1瓶       6 ml×1瓶         2-8℃保存

終止液:     3ml×1瓶       6ml×1瓶          2-8℃保存

濃縮洗滌液:（20ml×20倍）×1瓶   （20ml×30倍）×1瓶   2-8℃保存

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠組織因子途徑抑制物（TFPI）水平。用純化的大鼠組織因子途徑抑制物（TFPI）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入組織因子途徑抑制物（TFPI），再與HRP標記的組織因子途徑抑制物（TFPI）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的組織因子途徑抑制物（TFPI）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠組織因子途徑抑制物（TFPI）濃度,。

目的：本試劑盒用于測定大鼠血清,，血漿及相關(guān)液體樣本中組織因子途徑抑制物（TFPI）的含量。

服務承諾： 

供貨期：款到發(fā)貨,。
工作時間內(nèi)免費的技術(shù)咨詢和指導 ,。請
為客戶提供來樣檢測服務，zui大限度實驗結(jié)果的有效性（免費代測）,。

保存條件及有效期：

試劑盒保存：2-8℃| 有效期：6個月

【大鼠組織因子途徑抑制物（TFPI）elisa試劑盒】樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應再次離心。

2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實行,。

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。

5. 組織標本：切割標本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?/span>2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用,。

6. 標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

1.         標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在*,、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl,，混勻；然后從*孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,，混勻,；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ng/L,，1200ng/L ,，600ng/L，300ng/L,， 150ng/L）,。

2.         加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4.         配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5.         洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。

6.         加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

7.         溫育：操作同3,。

8.         洗滌：操作同5,。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.     測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

【大鼠組織因子途徑抑制物（TFPI）elisa試劑盒】注意事項：

1．  試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

2．  濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。

3．  各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4．  請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6．  底物請避光保存,。

7．  嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．  所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

9．  本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準。

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上,。

2.批內(nèi)與批見應分別小于9%和11%

檢測范圍：

0.2IU/L - 6IU/L

上海陽光試劑有限公司多年與：中科院﹑醫(yī)科院﹑農(nóng)科院等重點國家實驗室﹑清華大學,、北京大學、復旦大學,、解放軍總醫(yī)院,、*軍醫(yī)大學、安徽省農(nóng)科院等各大科研機構(gòu)保持長期合作關(guān)系,。竭誠為您提供行內(nèi)zui全,，的產(chǎn)品信息,。訂購！

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