大鼠 （Rat） 內(nèi)臟脂肪素 （Visfatin） ELISA試劑盒江蘇，淮安

本試劑僅供研究使用      標本：血清或血漿

 大鼠 （Rat） 內(nèi)臟脂肪素 （Visfatin） ELISA試劑盒江蘇,，淮安

試驗原理：

Visfatin試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知Visfatin濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將Visfatin和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后,，加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,，然后加入底物A,、B，和酶結(jié)合物同時作用,。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中Visfatin的濃度呈比例關(guān)系。

 大鼠 （Rat） 內(nèi)臟脂肪素 （Visfatin） ELISA試劑盒江蘇,，淮安

試劑盒內(nèi)容及其配制

試劑盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制

96/48人份酶標板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型

塑料膜板蓋1塊半塊即用型

標準品：80ng/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說明書進行稀稀

空白對照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型

標準品稀釋緩沖液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型

生物素標記的抗Visfatin抗體1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型

親和鏈酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型

洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按說明書進行稀釋

底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

標本稀釋液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型

自備材料

1．蒸餾水,。

2．加樣器：5ul、10ul,、50ul,、100ul,、200ul,、500ul、1000ul,。

3．振蕩器及磁力攪拌器等,。

安全性

1．避免直接接觸終止液和底物A、B,。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗。

2．實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。

3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項

1．試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存,。

2．實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質(zhì),。

3．不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。

4．使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器,。

5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6．洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水,。

7．底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,，有毒,。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8．加入試劑的順序應(yīng)一致,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。

9．按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,。

樣品收集,、處理及保存方法

1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。

2,、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3,、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,，取上清液

5、保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

試劑的準備

1．標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備,，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻,。稀釋比例按下表中進行：

80 ng/ml（6號標準品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul,。

40 ng/ml（5號標準品）100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液

20 ng/ml（4號標準品）100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液

10 ng/ml（3號標準品）100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液

5.0 ng/ml（2號標準品）100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液

2.5 ng/ml（1號標準品）100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液

0 ng/ml（空白對照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋,。

操作步驟

1．使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔,。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。

3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時。

4．甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。

5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。

6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。

7．每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。

8．取出酶標板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。

9．在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案

標準品濃度（ng/ml）

A8080樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

B4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

C2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

D1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

E5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

F2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

局限

6號標準品以上的結(jié)果為非線性的,，根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果,。

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。

3. 重復性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%,。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標（Y）,，相應(yīng)的Visfatin標準品濃度為橫坐標（X），做得相應(yīng)的曲線,，樣品的Visfatin含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度,。

3、檢測值范圍：0-80ng/ml

4,、敏感度： 0.1 ng/ml

AB0028-25gAmpicillin, sodium salt 氨芐青霉素鈉[69-52-3]25g

A6793-4LAcetic Acid 乙酸[64-19-7]4L

A1132-500gAcetoacetaniline 乙?；阴１桨?span id="7k3avqrfm" class="Apple-tab-span" style="white-space:pre">[102-01-2]500g

A5065-25g1-Acetonaphthone 1-萘乙酮[941-98-0]25g

A5066-100g2-Acetonaphthone 2-萘乙酮[93-08-3]100g

A6811-4LAcetonitrile 乙腈[75-05-8]4L

A6274-25g3-（α-Acetonylbenzyl）-4-hydroxycoumarin, sodium salt 華法林鈉[129-06-6]25g

A1756-100gAcetone oxime 丙酮肟[127-06-0]100g

A4087-25gN-Acetyl-DL-alanine N-乙酰-DL-丙氨酸[1115-69-1]25g

A4055-25gN-Acetyl-L-alanine N-乙酰-L-丙氨酸[97-69-8]25g

A2821-500gAcetylaniline 乙酰苯胺[103-84-4]500g

A6107-100g4-Acetylbiphenyl 4-聯(lián)苯乙酮[92-91-1]100g