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熒光定量PCR板實驗,，細節(jié)決定成敗,，有哪些注意事項不能忽視？
熒光定量PCR實驗時,，首先要做好防護,，佩戴一次性乳膠手套并經(jīng)常更換，使用負壓式生物安全柜防止污染,。實驗中,，嚴格防止氣溶膠交叉污染，使用一次性帶濾芯移液吸頭,，不在生物安全柜以外開啟試劑或PCR管,。試劑和樣本需嚴格按照生物安全規(guī)定操作，熒光探針避光保存,，RNA操作時使用無RNase的實驗器具,。所有試劑在開啟前后都要瞬時離心以去除氣泡。加樣時,，避免在PCR管上做標記,，不能用手接觸采光部位。實驗中,，設置無模板對照以排除非特異性反應,。實驗結(jié)束后，使用過的槍頭,、EP管密封存放,。注意模板降解、引物探針設計,、Mg2+濃度等問題,，確保擴增曲線和熔解曲線的特異性。