人谷氨酸（Glu）Elisa試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍： 96T
0.7μmol/L -22μmol/L
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中谷氨酸（Glu）含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人谷氨酸（Glu）水平,。用純化的人谷氨酸（Glu）
抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入谷氨酸（Glu）,，再與HRP
標記的谷氨酸（Glu）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物
TMB 顯色,。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏
色的深淺和樣品中的谷氨酸（Glu）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD
值），通過標準曲線計算樣品中人谷氨酸（Glu）濃度,。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（40μmol/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能
馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋,。
20μmol/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
10μmol/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
5.0μmol/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2.5μmol/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
1.25μmol/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、標準孔,、
待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，
然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去,，如此
重復5 次,，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié)：
計算
以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準,。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6 個月